自2014年12月份，默瑞生物首次獲得TwistDx代理商授權(quán)，此后一直獲得TwistDx代理商授權(quán)，因?yàn)槟�瑞生物在推廣RPA技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的卓越貢獻(xiàn)，2017年開始默瑞生物獲得TwistDx大中華區(qū)總代理授權(quán)，并負(fù)責(zé)TwistDx中文(/)的搭建與相關(guān)資料的翻譯。

 

英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴(kuò)增，開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增專利技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。

 

 

概念：重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應(yīng)溫度在37°C左右。

 

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進(jìn)行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。

 

以此為基礎(chǔ)的TwistAmp® 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

 

 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	儲存	檢測方法
TwistAmp Basic	TABAS03KIT	96次	-20℃	終點(diǎn)檢測：如凝膠電泳

 

 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	儲存	檢測方法
TwistAmp exo	TAEXO02KIT	96次	-20℃	實(shí)時熒光定量檢測

 

 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	儲存	檢測方法
TwistAmp nfo	TANFO02KIT	96次	-20℃	測流層析試紙檢測

FAQs

1、RPA技術(shù)有哪些特性:

　　RPA的特性：快速檢測 15min進(jìn)行單分子檢測試驗(yàn)， 簡易包裝 穩(wěn)定凍干形式試劑. 無需熱循環(huán)過程 擺脫任何儀器束縛. 便攜 設(shè)備要求低，貧瘠條件亦能 完成檢測

2、RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎

　　可以。RPA技術(shù)支持在同一個管中同時進(jìn)行多個擴(kuò)增反應(yīng)。不過，多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì)，以便每個引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)最好不要超標(biāo)太多。如果在一個反應(yīng)中使用兩個以上的擴(kuò)增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測多個擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。

3、能否對模板進(jìn)行定量

　　可以。擴(kuò)增子達(dá)到可檢出水平的時間，依賴于反應(yīng)起始時的模板量。初始模板的拷貝越多，擴(kuò)增子就越快達(dá)到可檢出水平。不過，這種定量需要精心的實(shí)驗(yàn)安排，確保對照反應(yīng)是同時開始的。舉例來說，可以利用鎂離子的添加時間進(jìn)行控制。因?yàn)殒V離子一旦進(jìn)入體系，RPA反應(yīng)就會開始。

　　此外，較慢的擴(kuò)增過程有助于更精確的定量。我們可以通過調(diào)整反應(yīng)條件或引物設(shè)計(jì)來減慢RPA的反應(yīng)速度。

4、能否進(jìn)行熒光終點(diǎn)分析

　　可以。這樣比較的是反應(yīng)開始時的熒光和反應(yīng)結(jié)束時的熒光，熒光增強(qiáng)意味著發(fā)生了擴(kuò)增。

5、能否支持生物素或熒光標(biāo)記的寡核苷酸

　　支持。在RPA反應(yīng)中，連有生物素或熒光團(tuán)的引物與未修飾的引物表現(xiàn)差不多。據(jù)悉還沒有發(fā)現(xiàn)任何差異。

6、跑膠前需要回收RPA產(chǎn)物嗎

　　需要。RPA反應(yīng)中的物質(zhì)會干擾瓊脂糖電泳，如果不進(jìn)行產(chǎn)物回收，跑出來的帶會出現(xiàn)拖尾。

　　

恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

取代PCR的核酸擴(kuò)增術(shù) ，

領(lǐng)域：廣泛應(yīng)用于臨床診斷，食品安全檢測，動物疾病檢測等領(lǐng)域

特點(diǎn)：快速，高效，特異，無需專門設(shè)備

 

　　LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法的特征是針對目標(biāo)DNA鏈上的六個區(qū)段設(shè)計(jì)四個不同的引物然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下(60～65℃)、經(jīng)一個步驟即可完成。

　　RPA：主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。

　　重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。

	LAMP	RPA
開發(fā)公司	日本榮研生物	英國TwistDx	——
酶組分	鏈置換DNA聚合酶	重組酶;單鏈結(jié)合蛋白;鏈置換DNA聚合酶	——
最適反應(yīng)溫度	60-65℃	37-40℃	Win!
反應(yīng)時間	40min左右	15min左右	Win!
引物數(shù)	2對	1對	Win!
狀態(tài)	液體	凍干	Win!
檢測方式	目視;比濁檢測	電泳;測流試紙;探針法熒光定量	——
可否用于下游應(yīng)用	否	否	——
儀器	水浴鍋或恒溫箱	無需任何儀器	Win!
國產(chǎn)化，價格低	價格相對較高	——
硬性缺點(diǎn)	氣溶膠，假陽性	終端檢測相對復(fù)雜，價格高	——

 

　　新一代RPA恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測儀T8--敏如紅隼

　　截止到11月30日， 凡在我司購買者均享有9折優(yōu)惠！

　　新一代RPA恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測儀T8特點(diǎn)：小巧的的，強(qiáng)效的，精準(zhǔn)的

 

　　紅隼具有紫外的視覺，它們在25m的高空可以看在獵物的尿跡。

1、小巧便攜

2、強(qiáng)效的FAM和ROX通道作為標(biāo)準(zhǔn)

3、精確且實(shí)時的屏幕輸出

4、自動磁力混勻

5、無需電腦

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可選配件（需另購）：外部電源(/products/yqhc/65.html)，手提箱(/products/yqhc/66.html)

 

 

犬內(nèi)臟利什曼病POCT檢測

A Novel Molecular Test to Diagnose Canine Visceral Leishmaniasis at the Point of Care

A Castellanos-Gonzalez, O.A. Saldarriaga, L. Tartaglino, R. Gacek, E. Temple, H. Sparks, P. C. Melby, B.L Travi

Prduct used：TwistAmp nfo kit

Paper Link：

http://www.ajtmh.org/content/early/2015/07/30/ajtmh.15-0145.abstract

 

RPA用于全基因組和基因特異性DNA甲基化檢測

Colorimetric detection of both total genomic and loci-specific DNA methylation from limited DNA inputs

Eugene J.H. Wee, Thu Ha Ngo, Matt Trau

Prduct used：TwistAmp basic kit

Paper Link：

http://www.clinicalepigeneticsjournal.com/content/7/1/65

 

 

Isothermal Recombinase Polymerase amplification (RPA) of Schistosoma haematobium DNA and 

oligochromatographic lateral flow detection

A. Rosser, D. Rollinson, M. Forrest, B. L Webster

Prduct used：TwistAmp basic kit；TwistAmp nfo kit

Paper Link：

http://www.parasitesandvectors.com/content/pdf/s13071-015-1055-3.pdf

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