對二代測序來說,裝載的樣本質量(核酸的質量和數(shù)量)非常重要。測序結果的成敗往往取決于你是否知道你的樣本有多少DNA(通常為ng級)。在NGS的工作流程中,從樣品中抽提核酸到開始進行文庫構建;文庫構建后期——構建條碼庫用于擴增;在裝載樣品到測序系統(tǒng)上測序前的所構建文庫的定量的幾個關鍵點上,對擴增后的文庫中的分子進行精確的定量檢測,對于確保片段的質量和高效的獲得數(shù)據(jù)是非常重要的。低估擴增文庫中的分子數(shù)量,會導致混雜的信號以及難以解析的數(shù)據(jù);相反地,高估分子的數(shù)量會降低結合模板的珠子或者DNA簇的產(chǎn)量,并且沒有充分利用測序能力。因此準確對樣本定量和評價質量決定了測序工作能否正常進行。
核酸的定量通常有兩種常用方法:紫外分光光度法和熒光法。這兩種方法在檢測原理、檢測靈敏度和操作方法上的大不相同,在實際運用中需要根據(jù)具體的實驗要求選擇最佳的方法來進行核酸定量。
此次講座將著重介紹幾種基于多功能酶標儀系統(tǒng)的紫外分光光度法和熒光法核酸定量方案,為二代測序的樣品前處理中的高通量核酸/文庫定量提供更好的解決方案。
近年來,二代測序(NGS)技術迅猛發(fā)展,除DNA靶向捕獲測序,RNA測序,外顯子測序,全基因組測序外,NGS的臨床應用也拓展至產(chǎn)前診斷,腫瘤早篩及用藥指導等方面。鑒于這些應用與人類健康疾病息息相關,NGS流程中的任意步驟都不容忽視,因此,文庫的質控至關重要。
Qsep100全自動核酸蛋白分析系統(tǒng)是光鼎生物科技有限公司自行研發(fā)的高通量毛細管電泳儀。Qsep100采用拋棄式預制膠卡夾,操作簡便,無需傳統(tǒng)的制膠,染色,點樣和拍照等繁瑣的步驟,具備通量靈活(1-96個樣本,任意個數(shù)),分辨率高(500bp以內,可達1-2bp),靈敏度高(pg級別),成本低的特點,可完美取代之前的微流控芯片原理的儀器,目前在NGS文庫質控和提取核酸(gDNA,cf/ctDNA,RNA)質檢中得到了廣泛的應用,并獲得了良好的口碑和一致的認可。
此外,Qsep100具備其他質控儀器所沒有的高分辨率的應用,如SSR,AFLP等分子標記的篩選。Qsep100是一個開放平臺,多重試劑盒擴增的PCR產(chǎn)物均可以通過其進行檢測分析,因此,疾控系統(tǒng)中所涉及的多重食源性致病菌檢測,致謝性大腸桿菌的檢測,也是一個非常簡便,高效的應用方向。
本講座講座將分享Qsep100全自動核酸蛋白分析系統(tǒng)在核酸質控方面的應用及優(yōu)勢。
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