細胞轉染效率低！
具有細胞毒性！
實驗條件摸索難，重復性不佳！
如果您使用的是化學法細胞轉染，一定不要錯過本次分享。

細胞轉染 是指將外源基因如 DNA，RNA 等導入細胞內的技術。隨著分子生物學的發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制細胞基因功能、實現(xiàn)基因調控的常規(guī)工具。市場上各種轉染試劑琳瑯滿目，各有千秋，然而沒有任何一種轉染試劑可以能夠適用于所有細胞種類、滿足所有實驗需求和目的，成分控認為轉染試劑的成分及作用機理對轉染效果及細胞生理作用影響顯著，是轉染試劑選擇的重要依據(jù)，選試劑時要留意成分哦。



嚴格來講，轉染的方法可以基于化學法、物理法（電穿孔、顯微注射等）以及病毒介導法，沒有一種方法是放之四海而皆準。作為成分控的小編，本次主要為大家介紹基于各類轉染試劑的化學法轉染。

• 基于磷酸鈣成分的轉染試劑，其主要作用原理是與 DNA 通過沉淀反應形成磷酸鈣-DNA 復合物，粘附到細胞膜表面，借助內吞作用進入細胞質。pH 值，鈣離子濃度，DNA 濃度，沉淀時間，細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結果產(chǎn)生影響，因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長，且重復性不佳。

• 基于脂質體的轉染試劑包括中性脂質體和陽離子脂質體兩種。中性脂質體是利用脂質膜包裹 DNA，借助脂質膜將 DNA 導入細胞膜內。目前應用比較廣泛的是帶正電的陽離子脂質體轉染試劑，DNA 并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電 的 DNA 自動結合到帶正電的脂質體上，形成 DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內吞被導入細胞。此方法操作簡單，重復性好，在體外轉染中有很高的效率，但具有一定的細胞毒性，可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響，需要去除血清。

• 基于陽離子聚合物的轉染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，前者細胞毒性相對較大，后者細胞毒性較小，但其轉染效率都高于脂質體轉染，適用也較為廣范。

• 以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性，可謂魚和熊掌不可兼得也。

新一代轉染試劑，不局限于單一成分，混合了不同專利配方的脂類（非脂質體）、加上蛋白質組分、以及各種的專利成分，兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢，且操作更加簡單，易于高通量

羅氏 X-TremeGENE 便是新一代轉染試劑的佼佼者，升級版的多組分混合試劑，兼具極高轉染效率和極低細胞毒性，在超過 350 株真核細胞株中獲得了高效轉染的驗證，尤其針對難轉染細胞株亦有出色表現(xiàn)。
 

圖 1. 兩種試劑對 CHO-K1 細胞轉染帶 GFP 標記的質粒，A 和 C 是轉染后熒光顯微圖，B 和 D 是明場顯微圖. 與競爭產(chǎn)品比較，X-tremeGENE HP 表現(xiàn)出更優(yōu)的轉染效率更低的細胞毒性

圖 2. 不同試劑在含血清的培養(yǎng)基中對四種很難轉染的細胞株進行轉染，X-tremeGENE HP 試劑遠優(yōu)于其他試劑

超過 350 種細胞株的高效轉染驗證（點擊以下圖片即可選購）

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默克自 2015 年成為羅氏生化試劑的全球獨家代理，并于 2017 年擴大代理協(xié)議，增加對 KAPA PCR/qPCR 產(chǎn)品及羅氏自有核酸提取、qPCR 產(chǎn)品的代理。至今，Merck 代理的 Roche 產(chǎn)品可以提供從細胞培養(yǎng)和功能分析、基因機理研究到蛋白機理研究的完整方案：

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• 細胞功能檢測試劑盒，如凋亡、毒性、活力、增殖等
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• PCR 和 qPCR 檢測試劑
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