單細胞樣本制備老失敗？
流式實驗得到數據不可靠？
流式圖不知道怎么分析？

「全線賦能“沃”的實驗」之實驗方法實戰(zhàn)教程
直播第四期將帶來

《流式細胞術》
從單細胞制備到流式細胞術，理論+實例
帶你快速get到其中的難點要點

直播時間
5月31日（周二）19：00

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主題：單細胞懸液樣本的分類及制備

• 單細胞懸液樣本類型
• 制備注意事項
• 制備方法實例

講師：馮啟崢

瑞沃德高級產品方案經理，專注動物傳染病學和細胞與分子免疫學研究多年，在動物疫苗研發(fā)、CRISPR的原核細胞應用方面有著較為豐富的經驗，致力于為客戶提供專業(yè)的細胞與分子生物研究方案。

主題：流式細胞術的原理及應用

• 儀器基本結構解析
• 實驗方法實操講解
• 技術應用介紹

昆明理工大學碩士研究生，已發(fā)表SCI論文4篇，在載體構建、藥物活性篩選、腫瘤模型構建、單細胞數據分析等方面有著豐富的經驗，研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗癌機理和單細胞測序分析。

上期直播間互動問題
這次我們全部為小伙伴解答

1、做外周神經損傷的小鼠能活多久？如何飼養(yǎng)？
外周神經損傷一般不會造成動物的死亡，但一些特殊情況會影響動物的存活率，比如為了避免在手術部位引起不良組織炎癥，我們應該盡量縮短手術時間，如果手術部位意外出血，要用棉簽適當按壓。如果出血沒有停止，就不要對這只動物進行進一步的實驗。術后動物應該放進干凈的鼠籠并分籠飼養(yǎng)，注意保溫。

2、脊髓損傷造模后，動物出現(xiàn)功能障礙不能自主排尿該如何護理？
每日按壓排尿3次，以防泌尿系統(tǒng)感染；連續(xù)3天，每天兩次向腹腔注射相同劑量青霉素預防感染。

3、使用纖維蛋白膠修復的是外周神經損傷的哪個類型或者說等級呢?
纖維蛋白膠可以應用于橫斷的神經，幫助受傷神經的近端和遠端殘端緊密對齊，是神經縫合技術的一種替代方式。

4、坐骨神經擠壓的結扎力度如何把控？
有一些文獻上會使用帶有力值的工具進行擠壓神經，如果我們沒有這類的工具，可以使用血管夾對神經進行夾持，保證力度的一致性。

5、有專門評估大小鼠前肢抓取能力的行為學實驗嗎?
針對于前肢的抓取能力，爪抓力測試儀可以測動物前肢，后肢的抓力，另外如果是判斷動物前肢抓取食物的精細運動，可以用樓梯式抓取測試儀來進行。

6、目前好像2D步態(tài)分析居多，慢慢也看到了3D步態(tài)分析，兩者相比各自有什么優(yōu)缺點呢?
步態(tài)沒有2D、3D的區(qū)別，國內使用較多的步態(tài)有2種：第一種是依靠壓力感應可以生成動物腳掌受力的情況，判斷動物的損傷情況；第二種是通過視頻記錄動物足部在運動時的軌跡，通過足部的運動過程計算生成動物活動過程中四肢運動的各項指標來判斷動物的損傷情況。這兩種方法從2個不同的方面完善了步態(tài)的分析數據，但實際上無法互相替代。一般來說大鼠步態(tài)用第一種壓力感應測試的會多一些，小鼠步態(tài)則用視頻記錄的多一些。所謂的3D步態(tài)是通過從側面拍攝動物運動時的腿部活動，對動物的步態(tài)運動進行更為細致的評估，與傳統(tǒng)步態(tài)記錄的是2個維度的信息，無法進行替代。由于需要識別動物腿部的關節(jié)，目前無法與足底步態(tài)很好的融合結果。

7、這種轉棒實驗是可以大小鼠通用的嗎？如何檢測到掉落？
轉棒大小鼠主機通用，但是跑道是需要替換的。設備通過紅外感應，電子感應等自動檢測動物掉落情況，停止計時。

8、外周神經損傷會導致疼痛致敏，在模型檢測中可以用什么疼痛檢測方法呢？
主要看測痛的部位，機械痛一般可以用vonfery針或電子測痛儀來進行測試，針對不同部位也有面部疼痛測試儀（三叉神經），壓感測痛儀（背部，較大的關節(jié)），鉗式測痛儀（整個腳，細小的關節(jié)），熱痛一般測試動物足底或尾部，使用紅外測痛儀或者甩尾測痛儀。

9、怎么手動排尿？
按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？
術后需輕輕按摩擠壓膀胱進行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不規(guī)則梯和錯步分析儀是不是指一個東西��？
是一種類型的儀器，不同廠家的名稱，測試方法，輸出的指標會略有不同。

12、轉棒實驗一直做不出差異怎么辦？
可能有2種原因：

①測試時動物已經恢復到與正常鼠一致的水平，所以做不出差異。

解決方法：將轉棒測試時間提前。

②測試難度過于簡單或者過于困難，導致差異很小，從而統(tǒng)計分析結果無差異。

解決方法：調整實驗難度，直到可以做出差異的結果。新型轉棒儀除了原先的勻速和勻加速以外還增加了階段加速等測試方法，實驗難度有了更大的調整空間。

13、兩爪及四爪攀爬實驗有合適的實驗設備嗎？
不規(guī)則梯結合自制實驗設備。

14、脊髓損傷后有哪些評估手段？
脊髓損傷后可通過行為學對運動及感覺進行評估。BBB法：一般用于觀察大鼠后肢行走及肢體活動，評分分為三個部分，0-7分評判動物后肢關節(jié)活動情況，8-13分評判后肢步態(tài)及協(xié)調功能，14-21分評判運動中爪的精細活動；BMS評分是在BBB評分基礎上針對小鼠的運動特點做出了完善和修改，是專門用于小鼠后肢功能的評分方法。其他運動相關行為學：步態(tài)分析系統(tǒng)用于評估步態(tài)動力學、協(xié)調性分析、平衡性分析等；轉棒儀可評估動物的運動協(xié)調性；行走障礙分析儀可分析簡單步態(tài)及運動協(xié)調性等。感覺功能相關行為學：Vonfrey測痛針用于評估對觸碰的敏感性；冷熱盤用來測試動物對冷熱刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠嗎 ？
有小鼠平衡木可以進行小鼠實驗。

16、請問外周神經損傷后有哪些手段可以評價感覺功能的損失？
感覺功能相關行為學：機械痛一般可以用vonfery針或電子測痛儀來進行測試，評估對觸碰的敏感性，針對不同部位也有面部疼痛測試儀（三叉神經），壓感測痛儀（背部，較大的關節(jié)），鉗式測痛儀（整個腳，細小的關節(jié)），熱痛一般測試動物足底或尾部，使用紅外測痛儀（用于量化對小鼠和大鼠后爪輻射或紅外熱刺激的熱閾值的方法）或者甩尾測痛儀（一種基于對嚙齒動物中熱刺激回避反應的潛伏期測量的疼痛實驗）。

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