近期，QD中國科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心全新引進(jìn)了由英國iotaSciences公司推出的單細(xì)胞可視化分選培養(yǎng)系統(tǒng)—isoCell。該設(shè)備具有高通量、自動化、高成活率等特點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)單克隆細(xì)胞系構(gòu)建、微生物分選與培養(yǎng)、單細(xì)胞分選、單細(xì)胞組學(xué)研究等功能。

日前，該設(shè)備樣機(jī)已完成調(diào)試，全國樣機(jī)巡展活動正式拉開帷幕。截止目前，已在國家干細(xì)胞庫、浙江之江實(shí)驗(yàn)室、中國醫(yī)科大學(xué)等地進(jìn)行了樣機(jī)測試，獲得了用戶的一致好評。

單細(xì)胞可視化分選培養(yǎng)系統(tǒng)—isoCell巡展測試現(xiàn)場

 
傳統(tǒng)的單細(xì)胞分離手段無法確保所獲樣品中100%僅有一個(gè)單細(xì)胞，可能存在多個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)，從而導(dǎo)致下游后續(xù)的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生誤差。此外，傳統(tǒng)構(gòu)建單克隆細(xì)胞系技術(shù)受限于單細(xì)胞的高度敏感性，成功率較低，也無法保證每一個(gè)單克隆細(xì)胞系均來自單個(gè)細(xì)胞。isoCell采用的GRID單細(xì)胞腔室技術(shù)，可以保證100%準(zhǔn)確的單細(xì)胞分選，并在GRID中可高度自動化地直接培育單克隆細(xì)胞系，成活率高達(dá)60%以上。同時(shí)，通過全流程可視化監(jiān)控，可保證每一個(gè)單克隆細(xì)胞系均來自于挑選的單個(gè)細(xì)胞。isoCell的分選、培養(yǎng)條件溫和，可以顯著提高單細(xì)胞克隆的存活率。此外，isoCell還可以將單細(xì)胞樣品按照特定的體積直接轉(zhuǎn)移到96孔板或PCR管中，實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞下游應(yīng)用的無縫銜接，確保后續(xù)單細(xì)胞組學(xué)信息的完整性。 

單細(xì)胞可視化分選培養(yǎng)系統(tǒng)—isoCell樣機(jī)

 
人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)的單細(xì)胞克隆

人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)構(gòu)建單克隆細(xì)胞系培養(yǎng)步驟繁瑣，細(xì)胞對異常的處理和操作非常敏感，傳統(tǒng)單細(xì)胞分選容易導(dǎo)致細(xì)胞和遺傳毒性應(yīng)激的積累，進(jìn)而導(dǎo)致不良分化和多能性喪失。使用isoCell可以溫和且自動化地將人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)進(jìn)行單細(xì)胞分選并進(jìn)行培養(yǎng)，高效地培養(yǎng)hiPSCs單克隆細(xì)胞系，顯著提高了細(xì)胞分離與克隆效率（如下圖所示）。

Day8 hiPSCs單克隆在GRID中長成

100%單細(xì)胞分離效率，80%左右單克隆形成效率

 
單細(xì)胞測序

傳統(tǒng)單細(xì)胞測序需對單細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增（WGA），然而傳統(tǒng)單細(xì)胞WGA受到如何獲得單個(gè)細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到小體積WGA反應(yīng)中的限制。通過isoCell可自動將K562細(xì)胞拾取并轉(zhuǎn)移到含3.5 µl scWGA試劑的PCR管中，實(shí)現(xiàn)scWGA反應(yīng)的無縫銜接。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示結(jié)果如下圖所示，單細(xì)胞WGA的DNA樣本(+)中兩種基因均被特異性擴(kuò)增，而陰性對照(-)中則沒有這兩種擴(kuò)增產(chǎn)物，與預(yù)期結(jié)果符合。

100%單細(xì)胞分選效率

單細(xì)胞WGA的DNA樣本擴(kuò)增結(jié)果

 
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