針對生物制品（重組疫苗、治療性抗體、重組蛋白）中宿主細胞殘留蛋白（HCP）檢測方法的可靠性驗證，伯樂生命（Bio-Rad Laboratories）發(fā)布了基于2D及Western Blot技術(shù)的宿主蛋白殘留檢測方法驗證方案，用以評估HCP定量試劑盒中多克隆抗體的特異性。生物制品中的宿主細胞殘留蛋白會導致過敏反應或潛在毒性等不良臨床反應風險。因此必須建立合適的HCP檢測驗證方法來嚴格控制生物制品的質(zhì)量。

 

ELISA是目前應用最廣泛的HCP檢測方法。該技術(shù)相對簡單、精度良好，方便設定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范。«中華人民共和國藥典»2010年版三部中的HCP檢測均是要求采用酶聯(lián)免疫法測定。在該檢測方法中， 用存在于生物制品中的HCP作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關重要。目前生物制品行業(yè)多以商業(yè)化的通用型HCP ELISA試劑盒來檢測產(chǎn)品中的宿主蛋白殘留（如Cygnus Technologies）。但宿主細胞的分泌型蛋白和部分死亡細胞釋放的結(jié)構(gòu)蛋白成分復雜，不同的工藝，加上相關基因產(chǎn)物需要經(jīng)過獨特的翻譯后修飾，這些都大大增加了HCP的數(shù)量和生化復雜性。因此，通用型HCP ELISA試劑盒中的多克隆抗體對宿主蛋白的特異性問題很難進行評估。若商品化ELISA試劑盒中的多克隆抗體特異性和適用性不夠高，則會帶來漏檢HCP的風險，從而對生物制品質(zhì)量安全帶來風險。

         

 

來自于Bio-Rad Laboratories的科學家使用此流程成功驗證了某一ELISA試劑盒對于不同CHO細胞系HCP檢測的適用性差異。從以下兩個結(jié)果來看，即使是相同的ELISA試劑盒，其多克隆抗體對不同CHO細胞系的總蛋白覆蓋率有很大差別（46%與20%）。顯然，對于第二個CHO細胞系所表達的蛋白質(zhì)產(chǎn)品，使用該ELISA試劑盒測定HCP殘留會導致較大的數(shù)據(jù)偏差。

      

Bio-Rad Laboratories發(fā)布的HCP殘留檢測驗證流程雖然以2D為基礎，但是該流程使用同一張膜上的總蛋白數(shù)據(jù)與Western Blot數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，所以很好的避免了2D實驗重復性對結(jié)果的影響，保證了數(shù)據(jù)的重復性與可靠性。在2013年WCBP論壇上FDA官員也明確了用于檢測HCP殘留的抗血清（多克隆抗體）一定要經(jīng)過驗證，而2D法被認為是最為合適的驗證抗血清方法。