| 產(chǎn)品及特點 |
本產(chǎn)品專門從各種軟骨組織樣品中快速純化總RNA的試劑盒，它能有效克服傳統(tǒng)TRIzol方法提取軟骨組織RNA時，十分容易產(chǎn)生糖蛋白和酸性多糖污染這一缺點。本產(chǎn)品具有下列特點：
- 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染。
- OD260/280一般均在1.9以上。
- RNA產(chǎn)率一般為5-15 ug/100 mg。
- 操作簡單，整個提取過程一般只需要10多分鐘。
- 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern雜交、mRNA純化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
- 本產(chǎn)品只能用于科研。
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| 規(guī)格及成分 |
本產(chǎn)品使用大扁盒包裝
| 成 份 |
編 號 |
規(guī)格 |
包裝 |
| 軟骨RNA純化溶液A |
211231a |
50 mL |
60mL本色瓶 |
| 軟骨RNA純化溶液B |
211231b |
15 mL |
15mL棕色玻璃瓶 |
| 軟骨RNA純化溶液C |
211231c |
50 mL |
60mL本色瓶 |
| 離心吸附柱 |
220144 |
50套 |
塑料袋 |
| 通用洗柱液 |
220143 |
50 mL |
60mL本色瓶 |
| RNA洗脫液 |
971207 |
10 mL |
10mL本色瓶 |
| 使用手冊 |
211231sc |
1份 |
無 |
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| 運輸及保存 |
常溫運輸和保存，有效期一年。軟骨RNA純化溶液B 4℃保存。 |
| 自備試劑 |
氯仿。 |
| 使用方法 |
- 先將50-200 mg新鮮或冷凍的軟骨組織在研缽中液氮研磨成粉，加入到裝有1 mL軟骨RNA純化溶液A的1.5mL離心管中（軟骨RNA純化溶液A低溫放置會產(chǎn)生沉淀，如果有沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并搖晃混勻），振蕩混合30秒。也可以將軟骨組織剪碎后與軟骨RNA純化溶液A在10-15mL塑料管中用Polytron勻漿機(內(nèi)切式勻漿機)勻漿5-20秒，再轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。
- 在離心管中加入0.3 mL的軟骨RNA純化溶液B和0.2 mL自備氯仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
- 室溫12000-15000 g離心3-5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細胞破碎物。
- 將上清液(約0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5 mL塑料離心管中，下層紫色有機相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。最好留下100 uL上清液不取。
- 加入等體積的軟骨RNA純化溶液C，充分顛倒混勻。
- 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
- 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
- 加0.7 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。
- 加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
- 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
- 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到自備的RNase-free離心管中，加入50uL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
- 12000-15000 g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
- RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：可以用Nanodrop測RNA的濃度。如果用常規(guī)分光光度計，則將5μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進而計算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。注意：測定OD時不要稀釋過度，否則濃度會在儀器能測的范圍之外。本方法提取的RNA測OD時一般最多只能稀釋10-20倍。
- RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。
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| 關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 |
固相RNase清除劑 |
北京天凈沙目前擁有5萬多種自產(chǎn)科研試劑產(chǎn)品，包括2萬多種PCR和LAMP檢測產(chǎn)品（包括動物病原、植物病原、GMO轉(zhuǎn)基因、種源性、中藥材真?zhèn)�、抗藥性、SNP）、數(shù)千種即用型溶液，數(shù)千種即用型DMSZ和ATCC培養(yǎng)基、數(shù)千種酶活性和代謝物檢測產(chǎn)品（酶法）、數(shù)千種質(zhì)粒和菌種、數(shù)千種分子生物學(xué)試劑、數(shù)千種組織化學(xué)和免疫組化產(chǎn)品等。
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