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熒光定量PCR服務(wù) & SNP分型服務(wù)
熒光定量PCR技術(shù)指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問:1470
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熒光定量PCR服務(wù)
 
ECO Real-Time PCR技術(shù)指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對起始模板進(jìn)行定量分析。免費設(shè)計優(yōu)化引物,使定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率達(dá)到90%以上,使相對定量結(jié)果更可靠。
 
系統(tǒng)特點
1. 超高準(zhǔn)確率的qPCR結(jié)果:動態(tài)范圍> 9 logs線性范圍;擁有檢測低于1個拷貝的超高靈敏度;對于辨別5000-10000的高拷貝區(qū)域也有99%的可性度。
2. 良好的均一性和可重復(fù)性:沒有邊緣效應(yīng)產(chǎn)生,整塊板子Cq的標(biāo)準(zhǔn)偏差等于0.063;不同批次的重復(fù)性高(R2=0.996)。
3. 可以實現(xiàn)High Resolution Melt(HRM)分析:其應(yīng)用在突變掃描、序列配對和基因分型等多個方面。
 
 
技術(shù)路線
 
樣品要求
1) 樣品類型:細(xì)胞、新鮮組織。
2) RNA樣本要求:無明顯降解,OD260/280值在1.9~2.1之間,濃度≥100ng/ul;DNA應(yīng)該去除干凈;qPCR反應(yīng)中,一個基因需要500ng RNA的量。
3) DNA樣本要求:DNA無明顯降解,OD260/280值在1.7~1.9之間,濃度≥ 50ng/μl;qPCR反應(yīng)中,一個SNP位點需要50ng DNA的量。
 
SNP分型服務(wù)
 
單核苷酸多態(tài)性(SNP,Single Nucleotide Polymorphism):是指在基因組水平上單個核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性。SequenomMassARRAY® 平臺利用SNP位點兩個等位基因之間的分子量差異來進(jìn)行檢測;驹頌榛|(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜 (MALDI-TOF MS) 技術(shù)。
 
技術(shù)特點
1. 靈活:自由選擇感興趣的SNP位點,一張芯片上,樣本和SNP位點的配對、樣本數(shù)量及位置可以自由選擇
2. 準(zhǔn)確:直接檢測測序分子量,準(zhǔn)確度超過99.7%。
3. 高通量:一張芯片上可完成384個樣品的多重IPLEX GOLD 實驗;每個反應(yīng)孔可實現(xiàn)18至40重反應(yīng)。
 
技術(shù)路線
 
樣品要求
1. DNA樣品:
1)避免肝素抗凝,避免EDTA溶解,避免反復(fù)凍融;
2)DNA濃度約10ng/ul , OD260/OD280=1.8;
3) 每反應(yīng)提供5ul DNA。
2. SNP位點:
序列格式:SNP位點前后各100bp,SNP以[A/G]表示,其它突變以N表示;
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