BTP-基于SILAC的定量蛋白組分析

SILAC即細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture,SILAC)，其實驗流程是在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入輕、中或重型穩(wěn)定同位素標(biāo)記的必需氨基酸(賴氨酸和精氨酸)，通過細(xì)胞的正常代謝，使新合成的蛋白帶上穩(wěn)定同位素標(biāo)簽。等量混合各類型蛋白質(zhì),酶解后進(jìn)行質(zhì)譜分析。通過比較一級質(zhì)譜圖中同位素峰型的面積大小進(jìn)行相對定量，同時二級譜圖對肽段進(jìn)行序列測定從而進(jìn)行蛋白鑒定。 

百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺，Orbitrap Fusion質(zhì)譜平臺，Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，推出基于SILAC的定量蛋白組分析服務(wù)技術(shù)包裹，您只需要將您的實驗?zāi)康母嬖V我們并將您的細(xì)胞寄給我們，我們會負(fù)責(zé)項目后續(xù)所有事宜，包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞標(biāo)記、蛋白提取、蛋白酶切、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。

關(guān)于樣品

1.您只需干冰將凍存細(xì)胞寄給我們即可，同時保證細(xì)胞具有可以傳代培養(yǎng)5次以上的能力；

2.如果您需要自己標(biāo)記細(xì)胞并完成細(xì)胞的刺激等處理過程，您只需要將標(biāo)記完成并且經(jīng)過處理的細(xì)胞樣品或者蛋白樣品干冰寄給我們即可；對于每個樣品，需要保證含有50-100ug蛋白。

一站式服務(wù)

您只需下單-寄送樣品

百泰派克一站式服務(wù)完成：樣品處理-上機(jī)分析-數(shù)據(jù)分析-項目報告

對于動物細(xì)胞來說有必需氨基酸和非必須氨基酸之分，必須氨基酸是指細(xì)胞自身無法合成，只能從體外獲取。SILAC定量技術(shù)就是利用這一原理，將細(xì)胞培養(yǎng)體系中的兩種必須氨基酸：賴氨酸和精氨酸（選擇此兩種氨基酸的目的是因為后續(xù)的酶切反應(yīng)會使用Trypsin進(jìn)行，該酶的切割位點是賴氨酸或者精氨酸后的肽鍵，選擇此兩種氨基酸對蛋白進(jìn)行標(biāo)記，保證酶切之后的每一個肽段均會帶有標(biāo)記）替換成穩(wěn)定同位素標(biāo)記的"重標(biāo)"賴氨酸和精氨酸，經(jīng)過細(xì)胞傳代培養(yǎng)，"重標(biāo)"氨基酸會逐步替換掉原來的"輕標(biāo)"氨基酸，之前的實驗表明，細(xì)胞傳代培養(yǎng)5此以上，上述替換過程可以基本完成。經(jīng)過標(biāo)記的"重標(biāo)"細(xì)胞蛋白與"輕標(biāo)"細(xì)胞蛋白有同樣的氨基酸序列，但是分子量有明顯并且固定的差異，保證"重標(biāo)"和"輕標(biāo)"肽段在質(zhì)譜分析過程中可以同時被鑒定到并且形成匹配關(guān)系，通過直接比較兩者質(zhì)譜峰的面積得到兩個肽段所代表的蛋白的相對定量關(guān)系。

基于SILAC的定量蛋白組研究路線

中/英文項目報告

在最終的技術(shù)報告中，百泰會為您提供詳細(xì)的中英文雙語版技術(shù)報告，報告包括：

1, 實驗步驟（中英文）

2, 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)（中英文）

3, 鑒定物質(zhì)的信息

4, 原始數(shù)據(jù)

5, 生物信息學(xué)分析