小分子單克隆抗體標(biāo)記條件
金墊標(biāo)記條件:
a. 1 ml 金液(20nm 左右)+30 微升 ( 1%K2CO3)+ 5mg/ml 抗體 1 ul,標(biāo)記量為 5 微克蛋白/ ml 金液。( 先加碳酸鉀還是先加抗體?)
b,室溫振蕩. 20-30 分。
c. 加封閉液 20 ul/ml,室溫振蕩.20- 30 分
d. 離心 12000 轉(zhuǎn),10 分
e. 150 ul 復(fù)溶液復(fù)溶(PH8.2),鋪金
F. C 線劃線: 羊抗鼠 1:30-1:100; T 線劃線: 做梯度。1:10-1:100
注意事項(xiàng):
- 每種蛋白抗原的物理性質(zhì)不同,所以不能用一貫的千篇一律的加氯化鈉的式看穩(wěn)定性,要看最終 T 線顏色的深度。
- ( 每個(gè)項(xiàng)目期初必須做兩個(gè)條件:1 是先加碳酸鉀后加抗體;2 是先加抗后加碳酸鉀,每種抗體不同,先后順序直接決定線條的有無)。
- 當(dāng)標(biāo)記時(shí)或者吹干后出現(xiàn)發(fā)紫,發(fā)灰,用保護(hù)劑便可解決 。
4,1%K2CO3 配置是 1g 碳酸鉀加到 100ml 水里。
目前發(fā)現(xiàn) RACT,FF(3C11),cap(11E11), cpfx(7E6), TC(10E5) 等單抗都是先加抗體后加碳酸鉀.
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