雜交瘤細(xì)胞株復(fù)蘇擴(kuò)大

實(shí)驗(yàn)過(guò)程及注意事項(xiàng)

郵寄活細(xì)胞時(shí)：收到細(xì)胞后直接將一支細(xì)胞轉(zhuǎn)到一個(gè)24T孔，放37℃co₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。約80%滿時(shí)擴(kuò)大。加入等體積培養(yǎng)基(17%HT培養(yǎng)基)，吹打細(xì)胞面，將細(xì)胞完全吹落下來(lái)，混勻并擴(kuò)至3-4孔飼養(yǎng)細(xì)胞孔，每孔補(bǔ)加新的培養(yǎng)基。

郵寄凍存細(xì)胞時(shí)：預(yù)先用17%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基鋪好飼養(yǎng)層細(xì)胞，鋪好后2-7天均可以使用，飼養(yǎng)層良好的狀態(tài)是飼養(yǎng)細(xì)胞由圓形變?yōu)榱庑�，三角形等形狀。收到凍存�?xì)胞后，取出一管細(xì)胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000轉(zhuǎn)離心3分鐘，棄上清，用600ul17%HT培養(yǎng)基懸浮，轉(zhuǎn)至24孔培養(yǎng)板中，放至co₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存：細(xì)胞長(zhǎng)至80%滿時(shí)將孔內(nèi)細(xì)胞上清棄掉，使用移液槍將500ul凍存液吹打細(xì)胞面，動(dòng)作輕柔，轉(zhuǎn)至細(xì)胞凍存管，放入凍存盒，并轉(zhuǎn)至-80冰箱，過(guò)夜后即可轉(zhuǎn)入液氮保存。

細(xì)胞復(fù)蘇：預(yù)先用17%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基鋪好飼養(yǎng)層細(xì)胞，鋪好后2-7天均可以使用，飼養(yǎng)層良好的狀態(tài)是飼養(yǎng)細(xì)胞由圓形變?yōu)榱庑危�三角形等形狀。從液氮�?nèi)取出一管細(xì)胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000轉(zhuǎn)離心3分鐘，棄上清，用600ul17%HT培養(yǎng)基懸浮，轉(zhuǎn)至24孔培養(yǎng)板中，放至co₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

   1.進(jìn)入操作臺(tái)前所用任何物品須經(jīng)酒精擦拭消毒，以防污染。

   2.移液槍使用時(shí)不要靠近火焰，使用前應(yīng)多換氣。

   3.配置好的培養(yǎng)基放置4℃三天內(nèi)可以使用。

   4.細(xì)胞傳代與細(xì)胞復(fù)蘇所用培養(yǎng)基應(yīng)于實(shí)驗(yàn)前一小時(shí)拿出，恢復(fù)至室溫方可使用。

   5.所需培養(yǎng)基和凍存液用之前進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)，以防污染。                 培養(yǎng)基：DMEM培養(yǎng)基+17%胎牛血清+HT

細(xì)胞凍存液：DMEM培養(yǎng)基：胎牛血清：DMSO=8：2：1

如有疑問(wèn)請(qǐng)致電山東綠都生物食品安全檢測(cè)事業(yè)部 武經(jīng)理 18266598399