分離培養(yǎng)技術(shù)的材料與方法！
 

一、材料
 
1、培養(yǎng)基：培養(yǎng)支原體用培養(yǎng)基。
 
2、器材及試劑：L玻棒、馬血清、抑菌劑。
 
二、方法
 
1、標(biāo)本的采集：支原體常侵及人和動(dòng)物的黏膜表面，可用滅菌棉拭子取分泌物接種于2—3ml支原體液體培養(yǎng)基的小管中。若標(biāo)本是組織塊，可在滅菌乳缽或玻璃勻漿器中研成乳漿后接種。取樣后應(yīng)盡快接種培養(yǎng)。
 
2、分離培養(yǎng)：接種固體培養(yǎng)基時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)拭子使標(biāo)本液體盡量擠出，用無(wú)菌毛細(xì)吸管吸取標(biāo)本1—2滴約0.2ml接種于平板固體培養(yǎng)基上，用L玻捧涂抹使液體標(biāo)本分布均勻，放在5%—10%CO2環(huán)境中37℃培育，3—5d后觀察結(jié)果。接種半固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基時(shí)，接種前半固體培養(yǎng)基在水浴中煮沸至完全融化后，待冷卻至50℃左右加入馬血清、抑菌劑等，搖動(dòng)使均勻，并待培養(yǎng)基冷至37℃左右，用無(wú)菌吸管接種標(biāo)本0.5ml于培養(yǎng)基中，搖勻后蓋以滅菌膠塞，37℃培育，觀察支原體菌落。液體培養(yǎng)基也如上接種。若有支原體生長(zhǎng)，培養(yǎng)基即出現(xiàn)顏色變化。
 
3、菌種的純化：在平板固體培養(yǎng)基上用放大鏡或低倍顯微鏡下可見(jiàn)“油煎蛋”狀的典型支原體菌落，可用滅菌小刀切取菌落瓊脂塊，移入液體或半固體中壓碎瓊脂塊進(jìn)行培養(yǎng)，蓋上膠塞，放37℃。待支原體生長(zhǎng)、繁殖，培養(yǎng)基變紅或變黃時(shí)，用液體培養(yǎng)基稀釋培養(yǎng)物至10（-4），10（-5），取0.2—0.3ml接種于平板固體培養(yǎng)基上。如上處理，反復(fù)分離純化2—3次，即可得支原體純種，保存作鑒定試驗(yàn)之用。
 
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