暗場(chǎng)顯微鏡主要是采用一種特殊的聚光器，在聚光器的下方中央被圓形黑盤擋住，光僅由周緣進(jìn)入，使光聚集于載玻片上，并斜照物體，物體經(jīng)斜射照明后，發(fā)出反射光進(jìn)入物鏡，這樣，造成顯微鏡視野黑暗，而其中的物體明亮。暗場(chǎng)顯微鏡是指采用暗視野進(jìn)行觀察的顯微鏡，暗場(chǎng)顯微鏡的原理就好比我們生活中的陽(yáng)光通過(guò)暗室時(shí)，可清楚地看到其中細(xì)微灰塵的現(xiàn)象是一樣的，即給樣品照明的光不直接穿過(guò)物鏡，而是由樣品上反射或折射的光進(jìn)入物鏡，因此觀察生活細(xì)菌及細(xì)菌運(yùn)動(dòng)時(shí)常采用該種顯微鏡。
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我們以釀酒酵母為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)其進(jìn)行暗視野觀察，以此來(lái)說(shuō)明暗視野顯微鏡是如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作的。
釀酒酵母是單細(xì)胞，卵圓形或球形，具細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)膜、細(xì)胞核（極微小，常不易見(jiàn)到）、液泡、線粒體及各種貯減物質(zhì)，如油滴、肝糖等 。  釀酒酵母生長(zhǎng)在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上的釀酒酵母菌落為乳白色，有光澤、平坦、邊緣整齊；細(xì)胞寬度2.5-10 μm，長(zhǎng)度 4.5 -21 μm，長(zhǎng)與寬之比為 1 -2，多為圓形、卵圓形或卵形。釀酒酵母作為單細(xì)胞真核生物的代表，發(fā)酵工藝成熟，生物安全性高，主要用于燃料乙醇、白酒、葡萄酒、啤酒等的釀造生產(chǎn)中。 釀酒酵母活菌、非活性成分及細(xì)胞組成成分也已廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)和飼料工業(yè)。
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1. 在使用暗視野顯微鏡進(jìn)行觀察時(shí)，有一些必要的注意事項(xiàng)我們要了解清楚：
進(jìn)行暗視野觀察時(shí)，聚光鏡與載玻片之間滴加的香柏油要充滿，否則照明光線于聚光鏡上面進(jìn)行全面反射，達(dá)不到被檢物體，從而不能得到暗視野照明。
2.  在進(jìn)行暗視野觀察標(biāo)本前，一定要進(jìn)行聚光鏡的中心調(diào)節(jié)和調(diào)焦，使焦點(diǎn)與被檢物體一致。
3.  由于暗視野聚光鏡的數(shù)值孔徑都較大（NA=1.2~1.4），焦點(diǎn)較淺，因此，過(guò)厚被檢物體無(wú)法調(diào)在聚光鏡焦點(diǎn)處，一般載玻片厚度為1.0 mm 左右，蓋玻片厚度宜在0.16 mm 以下，同時(shí)載玻片、蓋玻片應(yīng)很清潔，無(wú)油脂及劃痕，否則都會(huì)嚴(yán)重地?cái)_亂最
終的像。
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暗場(chǎng)顯微鏡觀察釀酒酵母實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1.  選1.0~1.2 mm 厚度的干凈載玻片一塊，滴上釀酒酵母懸液，加蓋玻片（注意切勿有氣泡存在）。
2.  將聚光鏡光圈調(diào)至1.4。
3.  光源的光圈孔調(diào)至最大。
4.  在聚光器上放一大滴香柏油，將標(biāo)本置載物臺(tái)上，旋上聚光器使油與載玻片接觸（不能有氣泡發(fā)生）。
5.  用低倍物鏡及7×目鏡進(jìn)行配光對(duì)準(zhǔn)物體。調(diào)節(jié)聚光器的高度，首先在載玻片上出現(xiàn)一個(gè)中間有一黑點(diǎn)的光圈，最后為一光亮的光點(diǎn)，光點(diǎn)愈小愈好，由此點(diǎn)將聚光器上下移動(dòng)時(shí)均使光點(diǎn)增大。
6.  換上所需目鏡和高倍鏡，緩慢上升物鏡進(jìn)行調(diào)焦，至視野中心出現(xiàn)發(fā)光的樣品。
7.  在蓋玻片上滴一滴香柏油，并將油鏡轉(zhuǎn)至應(yīng)在位置調(diào)節(jié)配光，進(jìn)行觀察。
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顯微鏡技術(shù)的不斷更新發(fā)展，使得我們對(duì)生活、自然研究有了更深入的了解，研究的不斷深入也使得我們更加了解自然規(guī)律，這是時(shí)代發(fā)展的必要條件。
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