體外三維基質中原代CD34+細胞的擴增

                     
試劑和材料：
1. 培養(yǎng)基：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的IMDM，添加1%牛血清白蛋白，10μg/ml胰島素，0.1mmol/L 2-巰基乙醇，50U/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素；
2. 48孔培養(yǎng)板；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. 纖維粘連蛋白（fibronectin）包被的細胞基質支架；
5. 細胞因子（干細胞因子，IL-6，IL-3，Flt-3配體）；

實驗方法：
1. 用含細胞因子的培養(yǎng)基重懸細胞（100ng/ml干細胞因子，20ng/ml IL-6，20ng/ml IL-3和100ng/ml Flt-3配體）；
2. 將2.5×105 CD34+細胞/ml接種到纖維粘連蛋白包被的48孔培養(yǎng)板；
3. 每周兩次半量更換新鮮培養(yǎng)基；
4. 兩周后收集細胞；
 （1）250g離心10min，從三維細胞基質支架中收集非貼壁的細胞；
 （2）貼壁的細胞用0.05%胰蛋白酶/EDTA孵育細胞基質，37℃孵育30min，隨后250g離心10min；