準確檢測血清血漿樣本中microRNA的利器與應(yīng)用
大量研究表明，血液循環(huán)中的microRNA表達變化指征著疾病的發(fā)生和發(fā)展階段。同時，血液樣品在臨床易于獲取，且穩(wěn)定不易降解，因此對于microRNA標記物篩選具有廣闊研究前景。
血清/血漿樣本用于microRNA研究的挑戰(zhàn)
• 血清血漿中不包含細胞，且microRNA含量低
• microRNA高度同源，例如hsa-let-7家族各成員
• 紅細胞破裂發(fā)生溶血后，會釋放抑制RT和PCR反應(yīng)的物質(zhì)
• 常規(guī)內(nèi)參（如U6等）在血清血漿中含量不穩(wěn)定，不適合作為內(nèi)參對照基因
準確檢測血清/血漿樣本microRNA的利器
丹麥Exiqon 公司miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片，將芯片的高通量優(yōu)勢與PCR的準確靈敏特點完整結(jié)合，實現(xiàn)對血清血漿等各種臨床樣本中的microRNA準確特異檢測：
• 基于LNA™專利技術(shù)；獨特的Universal RT反應(yīng)
• 康成microRNA研究技術(shù)服務(wù)超過8年，客戶SCI文章60余篇，平均影響因子5.5分
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Human Serum/plasma panel （168 microRNA）
專為精確檢測血清血漿中microRNA設(shè)計，可直接用于microRNA標記物篩選
• 重復(fù)性好：血漿樣本，兩次獨立實驗，相關(guān)系數(shù)R2達到0.96（圖一）
• 特異性強：區(qū)分單堿基差異microRNA；區(qū)分成熟microRNA和前體
• 靈敏度高：準確檢測血清血漿中microRNA，檢測限低至5個拷貝
最低僅需20μL的血清/血漿樣本，即可實現(xiàn)168個microRNA準確特異檢測
• 獨特的Universal RT反應(yīng)：一次逆轉(zhuǎn)錄制備的cDNA可作為所有microRNA PCR反應(yīng)的模板
• RNA需求量少，特別適合血清/血漿檢測，最低于僅需20μL血清/血漿樣本（圖二）
• 統(tǒng)一逆轉(zhuǎn)錄，簡化實驗步驟，消除技術(shù)誤差，提高準確性
• 所含168個microRNA，基于大量文獻數(shù)據(jù)和Exiqon長期積累的豐厚研究成果
專為精確檢測血清血漿中microRNA設(shè)計，可直接用于microRNA標記物篩選
• 重復(fù)性好：血漿樣本，兩次獨立實驗，相關(guān)系數(shù)R2達到0.96（圖一）
• 特異性強：區(qū)分單堿基差異microRNA；區(qū)分成熟microRNA和前體
• 靈敏度高：準確檢測血清血漿中microRNA，檢測限低至5個拷貝
最低僅需20μL的血清/血漿樣本，即可實現(xiàn)168個microRNA準確特異檢測
• 獨特的Universal RT反應(yīng)：一次逆轉(zhuǎn)錄制備的cDNA可作為所有microRNA PCR反應(yīng)的模板
• RNA需求量少，特別適合血清/血漿檢測，最低于僅需20μL血清/血漿樣本（圖二）
• 統(tǒng)一逆轉(zhuǎn)錄，簡化實驗步驟，消除技術(shù)誤差，提高準確性
• 所含168個microRNA，基于大量文獻數(shù)據(jù)和Exiqon長期積累的豐厚研究成果
嚴格的質(zhì)控系統(tǒng)，保障實驗結(jié)果可靠性
• 溶血判定：實驗前用Nanodrop檢驗樣本溶血情況，避免抑制PCR的物質(zhì)
• 評估RT反應(yīng)效率：RT反應(yīng)設(shè)置Spike-in
• 監(jiān)測PCR反應(yīng)過程：PCR芯片內(nèi)設(shè)陽性對照
• 擴增結(jié)果判定：采用SYBR green的PCR方法，可根據(jù)溶解曲線判斷擴增特異性
• 內(nèi)參設(shè)置：選擇血清血漿中穩(wěn)定高表達的microRNA（miR-423-5P等）為內(nèi)參，校正數(shù)據(jù)
嚴格的質(zhì)控系統(tǒng)，保障實驗結(jié)果可靠性
• 溶血判定：實驗前用Nanodrop檢驗樣本溶血情況，避免抑制PCR的物質(zhì)
• 評估RT反應(yīng)效率：RT反應(yīng)設(shè)置Spike-in
• 監(jiān)測PCR反應(yīng)過程：PCR芯片內(nèi)設(shè)陽性對照
• 擴增結(jié)果判定：采用SYBR green的PCR方法，可根據(jù)溶解曲線判斷擴增特異性
• 內(nèi)參設(shè)置：選擇血清血漿中穩(wěn)定高表達的microRNA（miR-423-5P等）為內(nèi)參，校正數(shù)據(jù)
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