動物手術(shù)前的麻醉不僅是為了減少動物疼痛滿足動物福利的要求,也是為了保證動物手術(shù)順利進(jìn)行。目前注射麻醉(比如使用戊巴比妥鈉、水合氯醛、烏拉坦、氯胺酮)在我國的動物麻醉中最為普遍,其優(yōu)點是不需要昂貴的設(shè)備,只需要注射器就行,但麻醉劑注射動物后,必須經(jīng)肝臟代謝完后,動物才蘇醒,麻醉時間很長,一般持續(xù)2-5個小時;因動物存在個體差異,注射劑量難掌握,劑量過大會造成動物麻醉過度死亡,劑量過小動物不能進(jìn)入麻醉狀態(tài)或進(jìn)入麻醉狀態(tài)比較慢。在發(fā)達(dá)國家,氣體吸入麻醉非常普遍,與傳統(tǒng)的藥物注射麻醉方式相比,具有以下顯著的共同優(yōu)點:
動物進(jìn)入麻醉狀態(tài)較快,蘇醒也迅速,一旦停止麻醉,一般2分鐘內(nèi)動物即可蘇醒;
麻醉深度很容易控制,若在手術(shù)過程中發(fā)現(xiàn)動物狀態(tài)不佳,可馬上停止麻醉或者快速充氧進(jìn)行搶救,因此安全性非常好;
動物的發(fā)病率和死亡率低,動物手術(shù)的成功率高;
麻醉劑在體內(nèi)不參與代謝,幾乎完全由肺泡經(jīng)呼吸排出,對實驗結(jié)果不造成影響,研究成果易得到國際認(rèn)可。
在具體的實際應(yīng)用中,我們可以明顯地看到異氟烷吸入麻醉的優(yōu)勢,下面就一些典型的動物手術(shù)實驗場景,舉例如下:
套管慢性給藥、微透析、光刺激(光遺傳學(xué))、生理信號記錄
導(dǎo)管植入顱內(nèi),待動物恢復(fù)后,首先拔出導(dǎo)管帽,然后植入注射內(nèi)管(探針或光纖)、通過管路(光纖跳線)連接注射器(激光器)。然而,植入內(nèi)管(探針或光纖)和連接管路(光纖跳線)這一過程(如圖1、2和3所示),雖然花費時間很短,也就幾分鐘的時間,如果動物不麻醉,動物會掙扎,配合不好,導(dǎo)致無法插管(插入光纖);如果在戊巴比妥鈉、烏拉坦等注射麻醉后進(jìn)行,操作容易進(jìn)行,但是這些麻醉方式的維持時間很長,往往達(dá)2-5個小時,不利于后期做清醒自由活動動物的給藥或光刺激,而且額外增加了使用這些麻醉劑帶來的副作用,測得的指標(biāo)不準(zhǔn)確,影響實驗結(jié)果的客觀性和可靠性。然而,如果使用異氟烷吸入式麻醉,則避免了這些問題的發(fā)生,而且操作簡單,只需將動物放置于實驗平臺上,帶上麻醉面罩,即可開始進(jìn)行操作。
圖1套管植入過程示意圖
MCAO腦缺血、心肌缺血造模手術(shù)
常見的一些開胸或深度手術(shù),比如,進(jìn)行心腦血管方面研究的MCAO腦缺血、心肌缺血造模(如圖4和5),動物死亡率往往較高,與采用注射麻醉的方式有很大關(guān)系,比如麻醉時間過長、麻醉深度無法掌控、手術(shù)過程中出現(xiàn)異常無法搶救、動物蘇醒較慢、麻醉劑的呼吸抑制作用較強(qiáng)等原因都有可能導(dǎo)致這一結(jié)果。然而,如果使用異氟烷吸入麻醉,可以避免使用注射麻醉導(dǎo)致的負(fù)面結(jié)果,既保證手術(shù)過程可控、順利進(jìn)行,又可保證手術(shù)后動物很快蘇醒,極大地降低了動物的死亡率;而且操作簡單,只需將動物放置于實驗平臺上,帶上面罩,即可開始進(jìn)行操作。
顱腦、脊髓創(chuàng)傷造模手術(shù)
顱腦、脊髓打擊創(chuàng)傷造模后,如果動物注射麻醉時間過長,動物不能很快蘇醒,則需要給動物進(jìn)行保溫,否則會增加動物的死亡風(fēng)險;而如果在打擊過程,使用異氟烷吸入麻醉,造模后動物很快可以蘇醒,明顯可以規(guī)避動物死亡風(fēng)險。
(脊髓打擊器來自瑞沃德公司,型號:68097)
小動物取血
取血是動物研究中常見的一類技術(shù),常見的取血方式有:靜脈、動脈、眼眶、心臟取血。在這些取血過程中,傳統(tǒng)的做法是直接用手抓取固定動物后開始采血(如圖6所示),或者用乙醚、注射麻醉后采血,然而,這些方式都有一定的缺點,比如,如果直接抓取固定動物,會對動物增加額外壓力,產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),抽取的血液相關(guān)指標(biāo)必會受到影響;如果用乙醚麻醉,麻醉時間較短,如果取血操作不熟練,需要進(jìn)行多次麻醉,而且乙醚刺激性非常強(qiáng),人體吸入后非常不舒服,對動物的呼吸道刺激也很強(qiáng)烈,麻醉時需要專人看護(hù),否則動物極易死亡。如果使用異氟烷吸入麻醉,則克服了這些困難,而且操作簡單,只需將動物放置于實驗平臺上,帶上麻醉面罩,即可開始進(jìn)行操作,如果進(jìn)行批量采血,效率非常高。
靜脈注射給藥
注射給藥的方法,包括肌肉、皮下、靜脈注射。注射前,傳統(tǒng)的動物固定方式采用的是固定器(如圖7所示),然而,即便動物固定后,往往也不是很配合,再加上尾靜脈注射操作難度較高,所以一次性注射的成功率較低,而且固定動物的操作花費時間較長;如果為了讓動物保持安靜,給動物進(jìn)行注射麻醉,結(jié)果是注射操作容易進(jìn)行,但是動物麻醉時間過長,不排除動物有死亡而無法搶救的風(fēng)險。如果在注射藥物前,首先使用異氟烷進(jìn)行麻醉,將動物直接放置于實驗平臺上,帶上麻醉面罩,動物將非常安靜,有利于靜脈注射藥物,工作效率大大提高,移除面罩后,動物很快蘇醒,死亡風(fēng)險幾乎沒有,而且異氟烷不參與體內(nèi)代謝,對生理指標(biāo)不產(chǎn)生影響。
藥效學(xué)評價(給藥后的動物行為檢測)
在一個新藥的臨床前藥效學(xué)研究中,動物行為檢測也是一種常見手段。動物給藥后,在短時間內(nèi)(比如半個小時內(nèi))進(jìn)行動物行為檢測一個基本要求就是動物需處于自由活動的清醒狀態(tài)。如果在給藥過程中,使用注射麻醉,因麻醉時間過長而不能按時正常地進(jìn)行行為觀測,而如果使用異氟烷吸入麻醉,在給藥后動物很快蘇醒,動物行為觀測則可以按實驗計劃正常進(jìn)行,取得各項行為指標(biāo)。
異氟烷麻醉與注射麻醉(戊巴比妥鈉、氯醛糖、烏拉坦、氯胺酮、丙泊酚)對實驗結(jié)果的影響
截止目前,已有多篇報道異氟烷吸入式麻醉與注射麻醉(戊巴比妥鈉、氯醛糖、烏拉坦、氯胺酮、丙泊酚)對實驗結(jié)果的影響,典型報道將后續(xù)提供……可以先參考以下幾篇文獻(xiàn):
1. The Impact of Four Different Classes of Anesthetics on the Mechanisms of Blood Pressure Regulation in Normotensive and Spontaneously Hypertensive Rats. M. BENCZE, M. BEHULIAK, J. ZICHA. Physiol. Res. 62: 471-478, 2013
2. Neuroprotective effects of lactate in brain ischemia: dependence on anesthetic drugs. Horn T , Klein J . Neurochem Int 2013 Jan.
3. Inhaled carbon dioxide causes dose-dependent paradoxicalbradypnea in animals anesthetized with pentobarbital, but not withisoflurane or ketamine. Yehuda Ginosar, Nathalie Corchia Nachmanson, Joel Shapiro, Charles Weissman, Rinat Abramovitch, Respiratory Physiology & Neurobiology 217 (2015) 1–7.
4. Effect of pentobarbital and isoflurane on acute stress response in rat. Xue-Yan Wu, Yu-Ting Hu et al. Physiology & Behavior 145 (2015) 118–121.
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