黃嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒使用說明
黃嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來源之一；同時也是核苷酸代謝的關鍵酶之一。XOD 主要分布于哺乳動物的心，肺，肝臟等組織中，當肝功能受損時，XOD 大量釋放到血清中，對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理：
XOD 催化黃嘌呤產生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：30mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存。
粗酶液提�。�
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 290nm，蒸餾水調零。
2、 XOD 檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二中加入 15mL 試劑一，充分混勻，待用；現(xiàn)
配現(xiàn)用；3、 測定前將 XOD 檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
4、 準備 96 孔 UV 板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，
檢測波長小于 340nm 務必使用 UV 板）。
5、在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μL 樣本和 250μL 工作液，立即混勻并計時，記錄 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算 ΔA＝A2-A1。
XOD 活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）XOD 計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=2131×ΔA
2、組織、細菌或細胞中 XOD 計算：（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=2131×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=4.26×ΔA V 反總：反應體系總體積，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）XOD 計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=4262×ΔA
2、組織、細菌或細胞中 XOD 計算：（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T =4262×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T =4262×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=8.52×ΔA V 反總：反應體系總體積，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L / mol /cm；d：96
孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。
