Westernblot熒光印跡膜成像：干膜or濕膜 ？

干膜，還是濕膜成像：這是一個(gè)問(wèn)題。

經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)的一天實(shí)驗(yàn)做熒光蛋白印跡，首先成像，以便可以看到實(shí)驗(yàn)成果。 這項(xiàng)工作流程沒(méi)有任何問(wèn)題，但這可能無(wú)法生成最佳圖像。 如果您正在進(jìn)行定性實(shí)驗(yàn)或具有高豐度的蛋白，那么對(duì)膜進(jìn)行成像是很好的。 然而，許多研究人員已經(jīng)轉(zhuǎn)向熒光蛋白印跡法來(lái)定量分析低表達(dá)目的蛋白。

濕膜不適合成像，因?yàn)樗鼈冊(cè)诔上襁^(guò)程中會(huì)慢慢變干，導(dǎo)致數(shù)據(jù)不一致。 由于濕膜的自發(fā)熒光與干膜不同，因此需要特別注意防止膜在成像過(guò)程中變干。 這意味著在成像過(guò)程添加緩沖液或?qū)⒂≯E膜放在塑料包裝中以防止干燥。 如果您曾經(jīng)對(duì)濕的印跡進(jìn)行成像，您就知道在長(zhǎng)時(shí)間曝光期間防止膜干燥是一件麻煩事。 使用熒光印跡的一大優(yōu)勢(shì)是隨時(shí)可進(jìn)行成像。濕膜經(jīng)歷長(zhǎng)時(shí)間曝光時(shí)，看到高背景并不罕見(jiàn)。 高背景對(duì)靈敏度產(chǎn)生負(fù)面影響，使低豐度目標(biāo)的檢測(cè)更具挑戰(zhàn)性。

濕膜成像顯然是不方便的，并且不太理想，但這并不意味著您需要等待數(shù)小時(shí)才能使膜干燥。 熒光蛋白印跡后快速干燥膜的方法是將其浸入甲醇中。 所需要的是PVDF膜在100％甲醇中快速浸泡15秒。 硝酸纖維素膜不耐化學(xué)品，因此使用20％甲醇代替。 酒精會(huì)從膜的孔隙中代出水分，加速干燥，讓您更快地對(duì)印跡進(jìn)行成像。 這個(gè)快速提示將立即為您提供一個(gè)完美的印跡!

熒光干膜成像提高靈敏度