養(yǎng)細(xì)胞時期的小編,
常常希望自帶一股開掛神力,
保護(hù)好嬌弱的細(xì)胞,拯救慘不忍睹的實驗!
如同《星球大戰(zhàn)》里擁有 ”原力光環(huán)“的主角們,
可以隔空移物,手接閃電,最后拯救世界!
小編至今疑惑“原力”到底是什么?
“ I am one with the force ,
and the force is with me.”
翻譯過來比較玄,很像中國武俠小說的內(nèi)力~
“ 我與原力同在,原力與細(xì)胞同在
凍存的細(xì)胞,滿血復(fù)活吧! ”
回 到 現(xiàn) 實
經(jīng)常有用戶反映“細(xì)胞凍存與復(fù)蘇遇到了問題”
“如何握住原力,讓你的細(xì)胞乖乖沉睡又滿血復(fù)活?”
逍鵬生物的老司機為此做了以下總結(jié):
選 好 細(xì) 胞 凍 存 液 是 基 礎(chǔ)
使用動物血清常常會遇到很多問題,例如:病毒感染、其他動物源的污染。使用無血清制品培養(yǎng)與凍存細(xì)胞,可以消除這方面的隱患。此外,無血清凍存液可以確保細(xì)胞在化學(xué)成分固定的條件下生長,更進(jìn)一步確保細(xì)胞凍存時的條件穩(wěn)定。
慢 慢 做 冷 凍
若您養(yǎng)的是貼壁細(xì)胞,請先將細(xì)胞消化下來;若是懸浮細(xì)胞,請直接按以下步驟進(jìn)行:
1. 以200-300g離心3分鐘,棄去上清,收集細(xì)胞。
2. 用BI無血清凍存液將細(xì)胞重懸(不需回溫),將細(xì)胞密度調(diào)整為3~5x106 cells/ml,添加到凍存管中(一般每管1ml)。
3. 建議將含有細(xì)胞懸液的凍存管放進(jìn)漸進(jìn)降溫盒或是保溫杯中,置于-80°C冰箱6小時以上或是過夜(或不需要程序降溫)。
4. 將凍存管迅速移到液態(tài)氮中保存。
5. 凍存24小時后,建議檢測細(xì)胞存活率。
細(xì) 胞 復(fù) 蘇 要 迅 速
1. 將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮中取出,置于室溫回溫,不用水浴溶解。此時可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng) 基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。
2. 在生物安全柜內(nèi),直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融,使細(xì)胞團(tuán)塊化凍。
3. 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基,再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200~300g,3分鐘離心收集細(xì)胞。
4. 倒去上清液,重懸細(xì)胞,移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
BI無血清細(xì)胞凍存液
不含動物成份
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇后,平均活細(xì)胞回收比例超過90%
Serum-Free Cell Freezing Medium
無血清細(xì)胞凍存液,貨號: 05-065-1A/B
無血清培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)該使用無血清的凍存液保存,以保持無血清培養(yǎng)體系的完整。本凍存液不含蛋白及動物組分,主要成分為DMSO和甲基纖維素。
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