對(duì)GMP車間潔凈區(qū)定期進(jìn)行滅菌是保證生產(chǎn)產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。目前在我國(guó)對(duì)空間進(jìn)行滅菌的常用方法是比較傳統(tǒng)的甲醛熏蒸法。甲醛的殺菌能力不容置疑，但是隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，其越來(lái)越受到專家的質(zhì)疑，因?yàn)榧兹┦且环N三致危害物。為了解決甲醛滅菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)以及毒性和殘留問(wèn)題（會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶狀殘留物），國(guó)內(nèi)有不少企業(yè)開始采用汽化過(guò)氧化氫滅菌技術(shù)。過(guò)氧化氫是一種廣譜殺菌劑，汽化過(guò)氧化氫滅菌技術(shù)由于滅菌時(shí)間短、無(wú)毒、無(wú)殘留，且滅菌效果容易驗(yàn)證，廣泛被歐盟國(guó)家認(rèn)可。我國(guó)的GMP認(rèn)證要與歐盟接軌，潔凈區(qū)采用過(guò)氧化氫滅菌技術(shù)必然為大勢(shì)所趨。

目前汽化過(guò)氧化氫滅菌已成為各國(guó)藥典、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)、消毒滅菌技術(shù)規(guī)范所推薦的方法，滅菌工藝已經(jīng)非常成熟，重復(fù)性好，有專門的化學(xué)指示劑和生物指示劑驗(yàn)證過(guò)氧化氫氣體分布均勻情況和無(wú)菌保證水平�？蓮V泛應(yīng)用于生物制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、生物實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物研究實(shí)驗(yàn)室等諸多領(lǐng)域。

一、試劑與儀器：
（1）生物指示劑（BiologicalIndicator，BI）：10⁶CFU/片的嗜熱脂肪芽孢桿菌，ATCC12980；
（2）化學(xué)指示劑（ChemicalIndicator，CI）；
（3）濃度為35%的食品級(jí)過(guò)氧化氫溶液；
（4）胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）；
（5）PEA MLT-17zeta汽化過(guò)氧化氫發(fā)生器；
（6）PEA LiRo氣體分布系統(tǒng)；
（7）滅菌車間：某疫苗生產(chǎn)單位GMP潔凈車間，潔凈區(qū)層高2.8m、面積100㎡，空間總體積約280m³。

圖1、某疫苗生產(chǎn)單位GMP潔凈車間

二、滅菌過(guò)程：
整個(gè)滅菌過(guò)程分為以下幾個(gè)階段：
（1）將PEA MLT-17 zeta發(fā)生器和LiRo氣體分布系統(tǒng)推入潔凈區(qū)前，先將設(shè)備表面用75％酒精擦拭清除干凈，根據(jù)滅菌空間體積大小，向儲(chǔ)液桶內(nèi)添加足量的過(guò)氧化氫溶液；
（2）通過(guò)潔凈車間的空調(diào)系統(tǒng)對(duì)潔凈區(qū)的溫度和濕度進(jìn)行調(diào)控，使二者達(dá)到設(shè)備可以滅菌運(yùn)行的區(qū)間范圍；
（3）在潔凈車間內(nèi)布置足量的生物指示劑和化學(xué)指示劑，并做好標(biāo)記；
（4）在設(shè)備端設(shè)置滅菌程序，一個(gè)完整的滅菌循環(huán)主要包含以下4個(gè)部分：調(diào)試階段（Waiting，Conditioning，Heating），主要是為人員撤離以及設(shè)備預(yù)熱階段；快速注入階段（Vapourizing1），在此階段過(guò)氧化氫氣體以一個(gè)較快的速率注入待滅菌空間，環(huán)境中過(guò)氧化氫氣體濃度迅速升高；慢速注入階段（Vapourizing2），在此階段過(guò)氧化氫氣體以一個(gè)較慢速率注入待滅菌空間，維持過(guò)氧化氫氣體濃度保持一定的時(shí)間；降解階段（Neutralisation，Afterrun，End），在此階段過(guò)氧化氫氣體迅速分解產(chǎn)生水分和氧氣，環(huán)境中過(guò)氧化氫氣體濃度迅速下降。

圖2、滅菌循環(huán)主要滅菌程序設(shè)置

（5）當(dāng)溫、濕度達(dá)到指定范圍后，關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)，人員撤出滅菌潔凈車間，啟動(dòng)滅菌循環(huán)，對(duì)車間進(jìn)行門密封；
（6）滅菌循環(huán)結(jié)束，開啟空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)通過(guò)潔凈空氣置換以排除房間內(nèi)部殘留的過(guò)氧化氫，從而使房間內(nèi)空氣中過(guò)氧化氫氣體濃度低于職業(yè)允許暴露水平1ppm；
（7）收取化學(xué)指示劑和生物指示劑，觀察統(tǒng)計(jì)化學(xué)指示劑的變色情況，無(wú)菌操作取出生物指示劑將其接種到TSB培養(yǎng)基中，所有培養(yǎng)基均需在培養(yǎng)箱中55℃～60℃的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)24h后和第7天的結(jié)果，同時(shí)做好陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照；
（8）經(jīng)過(guò)24 h的培養(yǎng)，若培養(yǎng)液變渾濁，則判定為陽(yáng)性；若培養(yǎng)液澄清，則為陰性；繼續(xù)培養(yǎng)至第七天，如果培養(yǎng)液變渾濁，則判定為滅菌不合格；如果培養(yǎng)液澄清，則判定為滅菌合格。

三、滅菌結(jié)果：
汽化過(guò)氧化氫滅菌技術(shù)，可對(duì)空氣與物體表面進(jìn)行生物除染，是一種非常有效的消毒滅菌方法。PEA的汽化過(guò)氧化氫滅菌技術(shù)整個(gè)過(guò)程采用全自動(dòng)化智能控制，可精確控制過(guò)氧化氫氣體濃度，材料兼容性好，可減少對(duì)工作人員與環(huán)境的危害，其滅菌過(guò)程、工藝具有重現(xiàn)性，綠色、環(huán)保、安全可靠。

圖3、PEA發(fā)生器和氣體分布系統(tǒng)在車間內(nèi)的擺放位置及BI和CI的布點(diǎn)位置

滅菌循環(huán)結(jié)束，所有的化學(xué)指示劑均變色明顯，表明過(guò)氧化氫氣體在空間內(nèi)分布均勻；所有的生物指示劑無(wú)論是在培養(yǎng)的第24h或者培養(yǎng)結(jié)束的第7天，培養(yǎng)基均未變渾濁，表明滅菌合格。

汽化過(guò)氧化氫滅菌技術(shù)是目前用于可密閉空間（如GMP車間、醫(yī)院病房、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心、小型倉(cāng)庫(kù)等）和各種人造設(shè)備（如隔離器、冷凍干燥機(jī)、孵化箱、傳遞窗、生物安全柜、壓力蒸汽滅菌器、過(guò)濾器和各類風(fēng)管及管道等）的一種可靠的消毒滅菌方法，具有廣闊的發(fā)展前景，是取代甲醛和臭氧等傳統(tǒng)空間消毒滅菌的理想方法，也是今后空間消毒滅菌的發(fā)展趨勢(shì)。