PCR/qPCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于各種分子生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。疫情之下,高通量的PCR檢測(cè)需求日趨上升,為了解決手工移液操作的失誤風(fēng)險(xiǎn)和操作難度,SPT Labtech公司的
mosquito和
dragonfly discovery液體工作站以超高精度的液體處理能力配合檢測(cè)試劑盒的優(yōu)秀性能,可以將PCR技術(shù)應(yīng)用到更高密度的檢測(cè)模式中,適應(yīng)如今的檢測(cè)需求和通量。
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mosquito LV 25 to 1200 nL |
mosquito HV 500 nL to 5 mL |
dragonfly 200 nL to 4 mL |
一、移液精準(zhǔn)可重復(fù)性高在PCR和qPCR加樣過(guò)程中,尤其在配置96孔或者384孔反應(yīng)板時(shí),采用高通量高精度的自動(dòng)化移液系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)體系構(gòu)建,可以避免在高壓工作下人工疲勞操作帶來(lái)的不均一性,減小實(shí)驗(yàn)誤差,并提高樣本處理效率。
mosquito和dragonfly discovery獨(dú)有的固相置換技術(shù),可以無(wú)視液體粘度和表面張力進(jìn)行精準(zhǔn)加樣,對(duì)于不同的液體如PEG、乙醇或gDNA都無(wú)需調(diào)整液體參數(shù),在1uL加樣下,CV值<3%。
固相置換技術(shù):8/16通道接觸式移液(左:mosquito);多通道非接觸式分液(右:dragonfly discovery)
二、用更少的試劑樣本做更多實(shí)驗(yàn)PCR實(shí)驗(yàn)體系的微縮化可以幫助研究人員降低試劑使用的成本。更重要的是,對(duì)于一些珍貴樣本(比如來(lái)自患者的臨床樣本,或者樣本庫(kù)的存檔樣本),它們往往具有很高的臨床價(jià)值但是總量非常稀少,實(shí)驗(yàn)體系的微縮化能有效節(jié)省樣本用量,使得這些樣本可以進(jìn)行多次分析。
使用
mosquito和
dragonfly discovery進(jìn)行PCR、qPCR體系建立,可以將常規(guī)的反應(yīng)體積從25μL降低至2μL,并且對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有任何影響。
小體積分液(左:mosquito,右:dragonfly discovery)
三、快速制備反應(yīng)體系mosquito和dragonfly discovery移液速度非?。使用mosquito進(jìn)行一塊384孔板的移液只需要3分鐘,使用dragonfly discovery進(jìn)行一塊384孔板的試劑分液只需要30秒。并且軟件操作界面簡(jiǎn)潔友好,操作十分簡(jiǎn)便。
PCR/qPCR體系構(gòu)建流程
1、應(yīng)用案例1由于
mosquito和
dragonfly discovery的小體系加樣非常精準(zhǔn),可以輕松地將常規(guī)PCR體系從40μL微縮化到了2uL,同時(shí)保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靈敏度和特異性。
圖:將反應(yīng)體系微縮化到了2uL, 在保持DNA模板不變的情況下,摸索了微縮化后各個(gè)組分試劑的用量
圖:將反應(yīng)體系微縮化到了2uL, 并同時(shí)摸索了模板DNA和其他試劑的用量,把樣本起始量降低到了40pg
2、應(yīng)用案例2分別使用
mosquito LV、
mosquito HV、
dragonfly discovery制備qPCR反應(yīng)體系(KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix (2X) Universal)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在反應(yīng)體系減少15倍的情況下,依然獲得了精確且重復(fù)性高的結(jié)果。
對(duì)于mosquito HV,單獨(dú)添加每種試劑成功將化體系微縮化至1.5μL (下圖A, Ct=20.90; CV=0.2),預(yù)混試劑后加樣成功微縮化至1μL (下圖B,Ct=25.68; CV=0.7)。對(duì)于mosquito LV,不論單獨(dú)添加每種試劑或預(yù)混后加樣,均將總體系降低至0.6μL (下圖C, Ct=18.04; CV=1.7; 下圖D, Ct=25.44;CV=0.9)。使用dragonfly discovery建立微縮化qPCR體系,單獨(dú)添加每種試劑時(shí)總體系為0.8μL (下圖E, Ct=18.27; CV=1.5),預(yù)混試劑加樣時(shí)總體系為0.6μL (下圖F, Ct=25.92; CV=0.8)。
qPCR擴(kuò)增曲線
3、應(yīng)用案例3馬里蘭大學(xué)基因組學(xué)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室使用CDC推薦的COVID-19檢測(cè)方法,搭配SPT Labtech mosquito HV和dragonfly discovery液體處理工作站進(jìn)行自動(dòng)化qPCR體系建立,建立了大規(guī)?焖贆z測(cè)平臺(tái),為抗擊新冠肺炎疫情做出貢獻(xiàn)。每天可進(jìn)行多達(dá)20000次檢測(cè),極大地增加了檢測(cè)通量和效率。

圖:新冠病毒檢測(cè)workflow
圖:mosquito和dragonfly discovery體積小巧,可以輕松的整合在各類層流罩或超凈臺(tái)中,節(jié)約實(shí)驗(yàn)室空間
使用mosquito和dragonfly discovery進(jìn)行微縮化、自動(dòng)化的PCR體系建立,相比于手工移液操作,具有極大的優(yōu)勢(shì):▪ 提高實(shí)驗(yàn)通量(在384孔板中建立PCR反應(yīng)體系,日檢測(cè)通量達(dá)到20000個(gè)/天)
▪ 減少樣本和試劑用量從而節(jié)約成本(微縮化PCR/qPCR體系至2μL)
▪ 提高流程的標(biāo)準(zhǔn)化和可重復(fù)性(減少人為操作帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)誤差)
▪ 一次性耗材有效降低交叉污染風(fēng)險(xiǎn)(槍頭經(jīng)過(guò)除酶滅菌處理)
▪ 工作站體積小巧易于整合(可整合機(jī)械臂、大型工作站、層流罩)