在培養(yǎng)細(xì)胞時，我們通常是沒有一個完美的參照物去對比每種細(xì)胞形態(tài)是否正常，只能根據(jù)細(xì)胞的三種基本形態(tài)去輔助判斷。但由于培養(yǎng)細(xì)胞環(huán)境各不相同，很多老師同學(xué)也無法判斷出自己的細(xì)胞形態(tài)是否正常，也會影響接下來的實驗。

今天我們小編將與大家一起對這個問題進(jìn)行探討~

細(xì)胞的基本形態(tài)

大多數(shù)培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞根據(jù)其形態(tài)可以分為三大類：

△成纖維細(xì)胞（成纖維細(xì)胞樣）
細(xì)胞是雙極或多極的，狹長型，貼壁細(xì)胞。

△上皮細(xì)胞
呈多角形，尺寸更為規(guī)則，貼附在基質(zhì)上呈散斑片狀生長。

△淋巴細(xì)胞
呈球形，通常懸浮生長，不貼附在基質(zhì)表面。

 

 

△HEF胎兒包皮成纖維細(xì)胞

△huh7人肝癌細(xì)胞

 

 

△病前

△病后

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞（永生）Raw264.7

 

這個時候大家肯定很想知道是什么原因?qū)е碌�，一般形態(tài)異常首先考慮的就是污染原因。

污染又大致分為以下幾點(diǎn)：細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、黑膠蟲污染。那么這幾種污染是如何區(qū)分的呢？

一、細(xì)菌污染

特征：

• * 在顯微鏡下或成黑色細(xì)沙狀，或背景有大量黑點(diǎn)
• * 可能造成細(xì)胞增殖緩慢或形態(tài)上的改變（多角、多核等），細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生空泡、細(xì)胞不附著

如果確認(rèn)是細(xì)菌污染，細(xì)胞嬌貴不舍得丟掉的不要擔(dān)心，我們已經(jīng)為您準(zhǔn)備好了相應(yīng)對策。

 

細(xì)菌的克星-抗生素

貨號	抗生素	作用對象	使用比例	儲存條件
03-049-1B	卡那霉素溶液（10mg/ml）	細(xì)菌（如G+、G-、支原體）	稀釋:1:100	-20ºC
03-035-1B	硫酸慶大霉素溶液（50 mg/ml）	細(xì)菌（如G+、G-、支原體）	稀釋: 1:1000	AMB室溫
03-031-1B	青鏈雙抗	細(xì)菌（如G+、G-）	稀釋: 1:100	-20ºC
03-031-5B	青鏈雙抗，10濃縮液	細(xì)菌（如G+、G-）	稀釋: 1:1000	-20ºC
03-032-1B	青鏈霉素，制霉菌素三抗	細(xì)菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20ºC
03-033-1B	青鏈霉素，兩性霉素B三抗	細(xì)菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20ºC
03-034-1B	青鏈霉素，新霉素三抗	細(xì)菌（如G+、G-）	稀釋: 1:100	-20ºC

 

二、真菌污染

真菌污染時會有類似棉花絮狀的漂浮物，念珠菌會呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長。

 

早期并不會使得培養(yǎng)基變黃變渾濁，但是在顯微鏡下可觀察到菌絲體。真菌形成的菌絲呈絲狀，管狀，樹枝狀，串珠狀。

  

真菌污染至少要三天后才能長出異常瑰麗的花紋圖案。

 

酵母菌等，當(dāng)其行出芽生殖時可通過一大一小的連體結(jié)構(gòu)識別。

真菌污染整體特征是：

• * 細(xì)胞被污染后，仍可生長，長時間細(xì)胞的活力狀態(tài)會變差
• * 梅雨季節(jié)時的污染率會提高
• * 呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長，成團(tuán)生長為真菌群

希望您的細(xì)胞不要也這樣“好看”，不然只能留作欣賞用途了，或者可以嘗試使用如下方法救治。

貨號	抗生素	作用對象	使用比例	儲存條件
03-029-1B	兩性霉素B（2500 ug/ml）	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000	-20ºC
03-030-1C	制霉菌素（10,000 units/ml）	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋:1:100 to 1:1000	-20ºC
03-032-1B	青鏈霉素，制霉菌素三抗	細(xì)菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20ºC
03-033-1B	青鏈霉素，兩性霉素B三抗	細(xì)菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20ºC

 

三、支原體污染

支原體廣泛存在于人和動物體內(nèi)，消毒不完全的器具也易帶入支原體。污染時細(xì)胞培養(yǎng)基可能依然澄清或者呈微黃色，抽提核酸與蛋白時可有高達(dá)30~50%為支原體來源，造成結(jié)果偏差。那么支原體污染都有哪些明顯特征呢？

• * 革蘭氏染色為陰性，0.15-0.3 μm，光學(xué)顯微鏡難以辨識
• * 明顯影響到細(xì)胞形態(tài)、增殖、基因表達(dá)與蛋白合成及代謝反應(yīng)

也可使用支原體檢測試劑盒進(jìn)行檢測：

該試劑盒可檢測的14種支原體是：M.fermentans（發(fā)酵支原體）, M.hyorhinis（豬鼻支原體）, M.arginini（精氨酸支原體）, M.Orale（口腔支原體）, M.Salivarium（唾液支原體）, M.hominis（人型支原體）, M.pulmonis（肺支原體）, M.arthritidis（關(guān)節(jié)炎支原體）, M.bovis（牛支原體）, M.pneumoniae（肺炎支原體）, M.pirum（梨支原體）and M.capricolum（山羊支原體）, as well as Acholeplasma（無膽甾原體）and Spiroplasmaspecies（螺原體）。

△電泳圖譜電泳結(jié)果（圖片來源：終端用戶僅供參考）

支原體檢測試劑盒的特異性:

EZ-PCR支原體檢測試劑盒（貨號：20-700-20）。

引物與美國國家生物技術(shù)中心（NCBI）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，并檢測16SrRNA靶區(qū)同源性。96種支原體具有相關(guān)序列同源性。

支原體殺除試劑


BIOMYC系列

BIOMYC-1 貨號：03-036-1B 主要成分：太妙菌素

BIOMYC-2 貨號：03-037-1B 主要成分：Minocycline

BIOMYC-3 貨號：03-038-1B 主要成分：環(huán)丙沙星

方案一

BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）的使用方法：

• * 加1ml的BIOMYC-1溶液至100 ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)4天。期間需加入含BIOMYC-1溶液的少許的新培養(yǎng)基；
• * 4天后，加1ml BIOMYC-2溶液至100 ml的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng)3天；
• * 以上是一個處理循環(huán)階段，必要時可繼續(xù)2－3次如上處理循環(huán)；
• * 在處理過程中，細(xì)胞需要做支原體污染檢測，以確認(rèn)效果，從而適當(dāng)減少實驗過程。

方案二

BIOMYC-3（03-038）的使用方法：

• * 加1ml BIOMYC-3至100 ml培養(yǎng)基中；
• * 持續(xù)培養(yǎng)14天，期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基；
• * 14天后，用不含BIOMYC-3的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞14天后再做支原體檢測。

經(jīng)濟(jì)考慮，用戶選擇一種方案即可；最佳方案是，客戶先用方案一處理一周期，再用方案二處理一周期。

友情提示：如果使用其中一種方案，不能根除支原體，說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內(nèi)；36，37，38三者聯(lián)合可有效根除實驗室80%以上的支原體污染。

四、黑膠蟲污染

在細(xì)胞復(fù)蘇或傳代時往往會出現(xiàn)黑膠蟲污染，并且與細(xì)胞呈現(xiàn)此消彼長的現(xiàn)象，但是培養(yǎng)基卻并不渾濁。黑膠蟲具有細(xì)胞毒性，可引起細(xì)胞生長遲緩或裂解凋亡。
黑膠蟲較明顯的污染特征：

• * 活躍游動
• * 呈卵圓狀，球狀，桿狀等

目前科學(xué)界對黑膠蟲的身份并無定論，Dr.Cell目前檢測的黑膠蟲樣本，62%為細(xì)菌，38%為支原體。

黑膠蟲殺除試劑
BIOMYC系列

BIOMYC-1 貨號：03-036-1B 主要成分：太妙菌素

BIOMYC-2 貨號：03-037-1B 主要成分：Minocycline

BIOMYC-3 貨號：03-038-1B 主要成分：環(huán)丙沙星

抗生素

主要成分：青、鏈、兩性霉素。
 

黑膠蟲殺除方案一

BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：

• * 加1ml BIOMYC-1和三抗溶液至100 ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)4天。期間需加入含BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養(yǎng)基；
• * 4天后，加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至100 ml的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng)3天；
• * 以上是一個處理循環(huán)階段，必要時可繼續(xù)2－3次如上處理循環(huán)；
• * 在處理過程中，細(xì)胞需要做支原體污染檢測，以確認(rèn)效果，從而適當(dāng)減少實驗過程。

黑膠蟲殺除方案二

BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：

• * 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100 ml培養(yǎng)基中；
• * 持續(xù)培養(yǎng)14天，期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基；
• * 14天后，用不含BIOMYC-3和三抗溶液的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞14天后再做支原體檢測。

好啦，今天我們就分享到這里啦~下期我們會接著分享后續(xù)細(xì)胞形態(tài)異常分析的其他方面噢~

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