細(xì)胞因子6（IL-6）檢測試劑盒使用說明
IL-6是一種分子量為21~26 kDa的糖蛋白，其來源主要是單核-吞噬細(xì)胞，也可由其他細(xì)胞產(chǎn)生，有多種調(diào)節(jié)作用，是機(jī)體細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要成員，除參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)和抗感染防御機(jī)制外，還與自身免疫疾病和某些腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，正常人血清中IL-6的平均含量低于10pg/ml，而當(dāng)患有某些疾病時，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、燒傷、腎臟移植排斥反應(yīng)、敗血癥休克，心臟粘液瘤、肝炎、全身性紅斑狼瘡、何杰金氏病以及某些腫瘤疾病，體液中的IL-6水平有不同程度升高，在許多情況下與病程和病情相平行。在有些疾病中，如愛滋病，血清中IL-6的水平與sIL-2R之間存在明顯相關(guān)性。因此，檢測血清、血漿及其他體液中IL-6的水平，不僅可以輔助臨床某些疾病的診斷，也可以對病情，預(yù)后及療效進(jìn)行評估。我們在制備了抗rHuIL-6單克隆抗體的基礎(chǔ)上，建立了檢測IL-6的夾心ELISA，敏感性可達(dá)100pg/ml。
原理：
采用兩株識別不同表位的抗IL-6單克隆抗體，其中一株作為包被抗體，以識別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的IL-6，另一株作為酶標(biāo)抗體，與結(jié)合于包被抗體的IL-6的另一表位結(jié)合，并催化底物顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-6的含量。
操作步驟：
- 將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。
- 將標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液作1：5稀釋，然后依次使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液作1：1梯度稀釋（對倍梯度稀釋）成7個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。
- 加待檢標(biāo)本：加待檢樣品、陰性對照及標(biāo)準(zhǔn)品，100μl/孔，37℃，1h。（8個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）。
- 加酶標(biāo)抗體：洗板3次，加入酶標(biāo)抗體
10０μl/孔，37℃，1h。
5. 顯色：洗板3次，加入顯色劑Ａ，Ｂ液各１滴，37℃顯色10min。
結(jié)果判斷：
1．目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，蘭色者為陽性，無色者為陰性。
2．酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液一滴，混勻后在4５0nm下測定各孔O.D值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-6的含量。
注意事項：
1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。
2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時保持瓶身垂直。
3．洗滌時每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。
4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個月。
5．細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、杞櫞酸鹽或EDTA抗凝血漿均可檢測。血清或血漿中殘存凝塊或紅細(xì)胞須經(jīng)離心去除，勿用溶血或脂肪過多的血清。標(biāo)本在2~8℃可貯存3天，超過3天應(yīng)放入－20℃或－70℃，避免反復(fù)凍融。
