《小鼠鏟屎官養(yǎng)成記》，每周為大家介紹一個(gè)小鼠繁育與健康的知識(shí)點(diǎn)，帶大家成為一個(gè)合格的小鼠鏟屎官。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的時(shí)候，小鼠的健康可能會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性！前幾期我們給大家介紹了小鼠健康監(jiān)測(cè)方式以及常見的健康檢測(cè)方法，那么檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)陽性該怎么處理呢？

對(duì)陽性結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)和分析
1.為什么要驗(yàn)證陽性結(jié)果
☑ 即使最好的檢測(cè)方法，也有可能出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，這是方法本身或人員操作的問題。例如ELISA法就比較容易出現(xiàn)假陽性；

☑ 之前的文章有提到，不同檢測(cè)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)結(jié)果可能是不一樣的；

☑ 所以一定要驗(yàn)證陽性結(jié)果。

2.如何驗(yàn)證陽性結(jié)果
☑ 直接溝通：如果可以的話，一定要和檢測(cè)人員對(duì)陽性結(jié)果進(jìn)行討論。如果是國(guó)內(nèi)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，可以直接溝通。國(guó)外機(jī)構(gòu)需要發(fā)郵件，而且有時(shí)差，溝通會(huì)比較耗時(shí)；

☑ 對(duì)方的驗(yàn)證方法：很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)，在告訴你陽性結(jié)果的時(shí)候，其實(shí)已經(jīng)驗(yàn)證過了。所以你要跟對(duì)方確認(rèn)，是用什么方法，怎么去驗(yàn)證的；

☑ 最好使用另一種方法驗(yàn)證：比如ELISA檢測(cè)陽性，然后使用IFA法對(duì)同一樣本進(jìn)行驗(yàn)證。只有兩種檢測(cè)方法驗(yàn)證的檢測(cè)結(jié)果是一致，檢測(cè)結(jié)果的可信度才會(huì)高一些。如果對(duì)方是用同一種方法，操作了兩次，你一定是要打問號(hào)的；

☑ 推薦送不同的檢測(cè)機(jī)構(gòu)去驗(yàn)證：這也是之前提到的，你要熟悉你的友軍。

確認(rèn)感染范圍
經(jīng)過確認(rèn)真的感染了病原體之后，我們要理性地接受事實(shí)并進(jìn)行分析。

1.首先要分析病原體的傳播途徑
【養(yǎng)兵千日】
☑ 平時(shí)就要把相關(guān)病原體的所有的資料都收集到一起。這個(gè)需要平時(shí)有意識(shí)地搜集資料并進(jìn)行整理，一定避免臨時(shí)抱佛腳；

☑ 在資料整理時(shí)，要有意識(shí)的排序。權(quán)威的、經(jīng)典的資料排在前面，并一定要注明資料來源；

☑ 如果是英文資料，最好要整理成中英文對(duì)照，中文方便自己和他人理解，英文方便確認(rèn)翻譯的準(zhǔn)確性。

【用兵冷靜】
☑ 把手頭所有的資料都看一遍；

☑ 先看權(quán)威性高且比較新的資料，再看比較舊的資料；

☑ 要并梳理出所有可能的漏洞，都重新推敲一遍。

【窮盡所有可能性】
☑ 有些病原體通過糞口途徑傳播，有些通過人員操作不嚴(yán)格傳播，有些通過氣溶膠傳播，有些通過污染環(huán)境而傳播，還有一些病原體是混合傳播的；

☑ 所以，在分析的時(shí)候，要列出所有可能性，然后逐一排查。

2.根據(jù)傳播途徑，
推測(cè)病原體在設(shè)施內(nèi)的傳播范圍
【推測(cè)，然后去驗(yàn)證】
☑ 傳染性非常強(qiáng)的病原體，例如小鼠諾如病毒、小鼠肝炎病毒、體外寄生蟲等。需要考慮整個(gè)設(shè)施感染的風(fēng)險(xiǎn)；

☑ 某些傳染性比較差的病原體，比如說螺旋桿菌，在管理嚴(yán)格的設(shè)施，可能只局限于某個(gè)籠架的幾個(gè)鼠籠；

☑ 在推測(cè)出病原體的傳播范圍之后，要對(duì)不同的區(qū)域，設(shè)計(jì)不同的采樣比例去采樣送檢。因?yàn)橥茰y(cè)畢竟只是推測(cè)，需要去驗(yàn)證。

【結(jié)果，再評(píng)估】
☑ 通過檢測(cè)結(jié)果，再次評(píng)估病原體在設(shè)施內(nèi)的感染范圍。我們只有在拿到檢測(cè)結(jié)果之后，才能確認(rèn)感染范圍，一定要用數(shù)據(jù)說話；

☑ 然后把設(shè)施分為三個(gè)區(qū)域：
低風(fēng)險(xiǎn)區(qū)——目前沒有檢測(cè)到陽性，需要持續(xù)關(guān)注的；
中風(fēng)險(xiǎn)區(qū)——目前沒有檢測(cè)到陽性，但是有感染的風(fēng)險(xiǎn)，需要加強(qiáng)檢測(cè)，持續(xù)關(guān)注；
高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)——已經(jīng)檢測(cè)到陽性，需要進(jìn)一步評(píng)估處理方案的。
可以參考新冠病毒的低風(fēng)險(xiǎn)區(qū)、中風(fēng)險(xiǎn)區(qū)、高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)。

查找感染來源
1.梳理所有環(huán)節(jié)
有時(shí)很難，但是一定要盡力去思考去分析，對(duì)所有的環(huán)節(jié)進(jìn)行梳理�？梢圆捎盟季S導(dǎo)圖輔助梳理。

2.分析陽性樣本
我們還要對(duì)所有的陽性樣本進(jìn)行分析，分析這些陽性樣本之間有沒有規(guī)律，這些陽性樣本是在一個(gè)飼養(yǎng)室，同一個(gè)操作人員，同一個(gè)籠架，還是說壓根沒有任何關(guān)系，完全隨機(jī)的。這種陽性樣本之間的關(guān)系，對(duì)分析樣本的感染來源也是非常關(guān)鍵的。

3.查從內(nèi)到外
從動(dòng)物的來源、接觸的物料、物品進(jìn)入方式、人員操作、消毒效果等等都要逐一排查。在這些關(guān)鍵因素都排查過之后，如果還沒有找到原因，你可以擴(kuò)大排查范圍，可以去查倉庫、供應(yīng)商、檢測(cè)機(jī)構(gòu)等等。所有你能想到的因素都要去查，直到找到感染來源。

4.示例
舉個(gè)例子，幾年前，賽業(yè)的動(dòng)物樣本，送國(guó)外機(jī)構(gòu)進(jìn)行COA檢測(cè)，PCR方法檢測(cè)到了乙型溶血鏈球菌。后來我們追查，這個(gè)菌來源于飼料中的魚粉。因?yàn)槭禽椪诊暳�，而且飼料無菌檢測(cè)是陰性的，所以這個(gè)菌是飼料中的死菌殘留，會(huì)隨著糞便排出體外，對(duì)動(dòng)物沒有影響。這就提醒我們，當(dāng)檢測(cè)到陽性結(jié)果的時(shí)候，不一定是動(dòng)物本身的問題。

對(duì)陽性病原體不同的策略
根據(jù)病原體對(duì)設(shè)施、對(duì)動(dòng)物、對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，制定處理方案，沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。

1.無需清除
你知道這個(gè)病原體的存在，經(jīng)過評(píng)估對(duì)動(dòng)物的影響有限，沒有必要清除或者清除的代價(jià)太大，可以放棄。例如之前推文提到的奇異變形桿菌。

2.test and cull
進(jìn)行大規(guī)模的篩查，然后剔除檢測(cè)到的所有陽性動(dòng)物。這點(diǎn)需要對(duì)這個(gè)病原體有自檢能力。否則送外部檢測(cè)，這個(gè)檢測(cè)費(fèi)用是非常昂貴的。還要求有能力將病原體控制在一定范圍之內(nèi)，否則人員操作如果不規(guī)范，以人員為媒介傳播病原體，分分鐘讓你的心血付諸東流。

3.逐步淘汰，重新建群
經(jīng)過評(píng)估，病原體對(duì)種群影響有限，對(duì)動(dòng)物使用的影響有限，考慮到種種原因，可以不立即淘汰種群。然后制定淘汰計(jì)劃，逐步淘汰就行。

4.緊急淘汰，控制感染，重新建群
經(jīng)過評(píng)估，病原體對(duì)種群影響很大，傳染性很強(qiáng)，或者對(duì)設(shè)施內(nèi)的其他動(dòng)物種群有影響，那我們就需要考慮立即淘汰，重新建群。例如小鼠肝炎病毒對(duì)于生產(chǎn)設(shè)施，就必須盡快淘汰，重新建群。

清除病原體的方式
1.IVF凈化
即胚胎移植，是目前最可靠的凈化方式。理論上有個(gè)別病原體不能通過IVF凈化的方式清除。例如：淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒，POLY（多瘤病毒）和腎細(xì)小病毒（MKPV）。但是前兩種病毒出現(xiàn)的比例極低，腎細(xì)小病毒是新發(fā)現(xiàn)的，目前國(guó)內(nèi)機(jī)構(gòu)關(guān)注的比較少。可以考慮使用臟墊料哨兵鼠方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

2.剖宮產(chǎn)凈化
是一種比較經(jīng)典的凈化方式。有資料表明能夠有效的清除小鼠細(xì)小病毒、幽門螺桿菌和MNV。但是它的可靠性比起IVF的要稍微差一點(diǎn)。所以為了保證凈化效果，可以考慮兩輪剖宮產(chǎn)凈化。

3.交叉哺乳
也稱為代乳。有資料表明代乳能有效清除多種常見的小鼠病原體，包括MPV、MHV、MNV和幽門螺桿菌。與剖腹產(chǎn)相比，它的優(yōu)勢(shì)在于成本更低，而且不需要對(duì)有價(jià)值的母鼠實(shí)施安樂死。

4.test and cull
有資料表明，這種方式能夠有效清除幽門螺桿菌、細(xì)小病毒、MHV、MNV和小鼠輪狀病毒。但這種方式對(duì)檢測(cè)能力、設(shè)施管理能力、人員操作要求比較高。

5.藥物治療
藥物治療效果不可靠，而且只適用于個(gè)別的病原體，有資料提到IVC飼養(yǎng)的撓蟲和螨蟲的治療。可以考慮用于特別珍貴的稀有品系，不適合用于治療大規(guī)模種群動(dòng)物。

6.burn-out
如果一個(gè)種群發(fā)現(xiàn)了病毒感染，在停止繁育和新引進(jìn)動(dòng)物的基礎(chǔ)上，讓該病毒在現(xiàn)有免疫健全動(dòng)物中充分傳播、感染所有動(dòng)物并通過動(dòng)物的免疫系統(tǒng)清除病毒，使病毒在現(xiàn)有動(dòng)物群體中“燃盡“（Burn out），這一過程約需要15周。歷史上曾成功過，但目前不建議使用。因?yàn)檫@種成功，在我們現(xiàn)在這種設(shè)施以及現(xiàn)在飼養(yǎng)的動(dòng)物種群中，已經(jīng)很難復(fù)制了。