在細(xì)胞培養(yǎng)系列文章的前兩彈中，我們介紹了細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)以及細(xì)胞房應(yīng)該如何建設(shè)。那么在細(xì)胞培養(yǎng)最終章，我們將視線(xiàn)聚焦到常常會(huì)影響大家實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的一部分——細(xì)胞污染。

什么是細(xì)胞污染？
凡在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中混入對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)以及生存有害的成分以及造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染。

一般情況下，細(xì)胞污染根據(jù)污染源的不同，可分為物理污染、化學(xué)污染和生物污染。
 

一、物理污染

物理污染是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中最容易被實(shí)驗(yàn)人員忽視的一種污染，往往是由一些放射性物質(zhì)、輻射、或者是溫度和其他物理環(huán)境的變化引發(fā)的。

這些物理性的變化會(huì)改變細(xì)胞培養(yǎng)體系中的一些生化成分，進(jìn)而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制甚至死亡，或者細(xì)胞的代謝發(fā)生變化。

如何避免物理污染的產(chǎn)生？
通過(guò)合理設(shè)計(jì)細(xì)胞房布局和規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作可以大大降低物理污染的概率。

1、合理設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室布局
一些會(huì)引發(fā)機(jī)械震動(dòng)的設(shè)備如渦旋振動(dòng)儀、離心機(jī)等，建議不要放在二氧化碳培養(yǎng)箱附近。常用試劑按照存放要求（4℃或者-20℃的溫度條件下，某些特殊試劑有避光的要求）置于固定的位置，并且避免周?chē)�有同位素或者其他放射性物質(zhì)的存在。

2、規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作
培養(yǎng)箱在使用過(guò)程中，盡量避免頻繁開(kāi)關(guān)門(mén)以免造成二氧化碳濃度和溫度的長(zhǎng)時(shí)間或者大幅度的波動(dòng)。處理細(xì)胞（如進(jìn)行傳代操作）時(shí)，也不宜長(zhǎng)時(shí)間讓細(xì)胞處于室溫狀態(tài)，影響其生長(zhǎng)。

用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基、緩沖液、胎牛血清等，一般情況下需保證溫度在37℃左右時(shí)再用于細(xì)胞，以免溫度過(guò)低損傷細(xì)胞。
 

二、化學(xué)污染

化學(xué)污染往往存在于培養(yǎng)環(huán)境的各種介質(zhì)中，是造成細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的污染之一。培養(yǎng)介質(zhì)中的雜質(zhì)、水、試劑、耗材、以及常用的玻璃器皿等都可能造成化學(xué)污染。

一些常用的玻璃器皿，清洗不到位也會(huì)導(dǎo)致一些清洗劑的殘留，進(jìn)而影響其盛放試劑的純凈度。

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程最常使用到的水（包括蒸餾水、雙蒸水、超純水等），或多或少都會(huì)存在一些雜質(zhì)。即使是去除了金屬離子、內(nèi)毒素等的超純水，也會(huì)隨著放置時(shí)間純凈度會(huì)下降，在實(shí)驗(yàn)室中盡量需要現(xiàn)配現(xiàn)用。另外，大部分自行配制的試劑溶液，依據(jù)性質(zhì)不同需要通過(guò)過(guò)濾或者高溫滅菌的方式除去其中的雜質(zhì)。

如何避免化學(xué)污染的產(chǎn)生？

嚴(yán)格清洗實(shí)驗(yàn)室常用器皿，以及控制用水和試劑能極大的降低化學(xué)污染的風(fēng)險(xiǎn)。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)常用的玻璃器皿建議進(jìn)行多層級(jí)清洗再用蒸餾水潤(rùn)洗滅菌后使用；實(shí)驗(yàn)室用水建議即配即用。一些試劑如胎牛血清這種細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中必不可少的。但由于血液物質(zhì)的成分復(fù)雜性，和生產(chǎn)工藝的成熟度不同，導(dǎo)致每一批次的血清制品都會(huì)有略微的差別。盡可能的使用同一批次的血清產(chǎn)品，是保證化學(xué)環(huán)境穩(wěn)定的前提。
 

三、生物污染

生物污染是細(xì)胞培養(yǎng)新手最容易遇到的一種污染情況。通常情況下科研人員普遍認(rèn)知的污染是細(xì)菌污染，其實(shí)生物污染還包含真菌、病毒、支原體、酵母等其他微生物以及不同細(xì)胞之間的交叉污染。

常見(jiàn)的細(xì)菌通常是大腸桿菌、葡萄球菌等。細(xì)菌污染比較容易察覺(jué)，細(xì)菌的快速增殖會(huì)產(chǎn)生大量的酸性代謝物質(zhì)，導(dǎo)致培養(yǎng)基迅速變黃，并有肉眼可見(jiàn)的渾濁現(xiàn)象。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，如無(wú)特殊要求，在培養(yǎng)液中加入一定濃度的抗生素是有助于抵御細(xì)菌污染的。

相較而下，真菌的生長(zhǎng)就會(huì)緩慢許多，其對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)體系的影響也相對(duì)較慢。一般情況下，實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的產(chǎn)生污染的真菌多為白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌等。這些菌株在污染后期往往會(huì)形成白色或者是黃色的肉眼可見(jiàn)的漂浮物，在高倍顯微鏡下也可以看到明顯的菌絲。

而對(duì)于病毒和支原體這種污染情況，則更難在污染初期被研究人員察覺(jué)，并且會(huì)在潛移默化中對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖產(chǎn)生一定的危害與影響。

另外，細(xì)胞污染也是一種生物污染，如在多種細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，某細(xì)胞混入了另一種細(xì)胞的培養(yǎng)體系。

如何避免生物污染的產(chǎn)生？
以上生物污染的發(fā)生，往往是實(shí)驗(yàn)人員在同時(shí)進(jìn)行多次細(xì)胞傳代、操作時(shí)未更換吸頭或是共用移液管等造成的。嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化執(zhí)行無(wú)菌操作流程就可以避免。
同時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員也需要保持個(gè)人衛(wèi)生，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作前，應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)服、手套、口罩等防護(hù)措施準(zhǔn)備齊全。

無(wú)論何種污染，合理的使用規(guī)范都能有效避免。那么為細(xì)胞選擇一個(gè)合適的“家”是在細(xì)胞培養(yǎng)中最最重要的一步，瑞沃德二氧化碳培養(yǎng)箱將是您的不二之選。

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