細胞貼壁的過程：細胞首先分泌細胞外基質(zhì)，這種細胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿的底面）。然后，細胞通過其表面表達的黏附因子與這些細胞外基質(zhì)結(jié)合。一些特殊的促細胞附著物質(zhì)（如層粘連蛋白、纖維連接蛋白、Ⅲ型膠原、血清擴展因子等）可能參加細胞的貼附過程。這些促細胞附著因子均為蛋白質(zhì)，存在于培養(yǎng)液尤其是血清中。在培養(yǎng)過程中，這些帶陽電荷的促貼附因子先吸附于底物上，懸浮的圓形細胞再與已吸附的有促貼附物質(zhì)的底物附著，以后細胞將伸展成其原來的形態(tài)。所以細胞貼壁與否和細胞本身分泌細胞外基質(zhì)的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數(shù)量有關，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關。

細胞不貼壁的一些原因:
1. 胰酶消化時間把控不當：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。
2. 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細胞的貼壁效果會下降很多。
3. 支原體或細菌的污染。
4. 培養(yǎng)液配制、儲存不當，如pH值過堿，Gln量太少等原因。
5. 復蘇的細胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。
6. 接種細胞數(shù)目太少，無法分泌足夠的細胞外基質(zhì)。
7. 復蘇時處理速度太慢，復蘇過程不當。

如何促進細胞貼壁?
1. 適度消化細胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落，2min足矣，P19Cl6和293細胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
2. 最好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對培養(yǎng)瓶進行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。
3. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。
4. 使用合適的細胞外基質(zhì)或貼壁試劑。
5. 復蘇新的細胞，第一周用20%血清幫助細胞復原。
6. 傳代接種一定要鋪的均勻，避免細胞抱團生長。
7. 細胞傳代24小時之內(nèi)，最好不要晃動，以免影響貼壁。
8. 體內(nèi)上皮細胞生長在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長。人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)，可以用γ射線照射后的3T3細胞為飼養(yǎng)層，另外降低pH、Ca2+含量和溫度，均有利于上皮細胞生長。