自動化基因測序文庫構(gòu)建工作站與手動制備的區(qū)分及優(yōu)勢
瀏覽次數(shù):2362 發(fā)布日期:2022-8-23
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自動化應(yīng)對NGS實(shí)際應(yīng)用之挑戰(zhàn)
2002年,SARS疫情爆發(fā)后,從11月廣東佛山首個(gè)病例被報(bào)道,到次年4月病原體SARS冠狀病毒最終被鑒定,歷時(shí)整整5個(gè)月。
2019年底,又一場疫情肆虐全球。而這一次,中國科學(xué)家團(tuán)隊(duì)僅花費(fèi)數(shù)天時(shí)間便鎖定“真兇”—新型冠狀病毒(SARS-CoV-2),并在第一時(shí)間公布了病毒的全基因組序列,為全球?qū)挂咔橼A得了寶貴時(shí)間。
這是一起科技造福人類的故事,而故事背后的主角就是新一代測序技術(shù)(Next Generation Sequencing,NGS)。
作為現(xiàn)代生物技術(shù)的重要組成部分,NGS應(yīng)用范圍越來越廣,以NGS作為標(biāo)題關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索可以看到相關(guān)論文研究也逐年上升(圖1)。
圖1:NGS相關(guān)的文獻(xiàn)研究數(shù)量
隨著二代測序技術(shù)的蓬勃發(fā)展,整體實(shí)驗(yàn)流程耗時(shí)較長(圖2),建庫過程紛繁復(fù)雜(圖3),成為困擾大家的一個(gè)問題。
圖2:測序基本流程
圖3:基因建庫流程
而文庫制備是NGS實(shí)驗(yàn)流程非常關(guān)鍵的一環(huán)。如果實(shí)驗(yàn)室需要處理成百上千的文庫樣本,在人力有限的情況下,耗時(shí)的手動處理可能會成為災(zāi)難。樣品量大、重復(fù)性差、人工處理錯(cuò)誤以及批次的不一致都將導(dǎo)致更高的成本和更長的周期。
隨著自動化需求的不斷提出,越來越多的自動化儀器廠家推出了適配自動化建庫過程的移液工作站,但是這種文庫制備移液工作站,往往是在現(xiàn)有移液工作站的框架下,整合溫控模塊、擴(kuò)增模塊、振蕩模塊、磁力架模塊等多種功能模塊,實(shí)現(xiàn)文庫構(gòu)建的自動化。但是由于其脫胎于大型的移液工作站,因此往往存在平臺過大不適于小批量實(shí)驗(yàn),以及操作軟件復(fù)雜,需要以編程形式進(jìn)行程序的編輯等等。因此此類建庫移液工作站,在客戶端較難實(shí)現(xiàn)較好的靈活匹配多種建庫試劑盒的實(shí)際需求。
除此之外,市面上還有一類單樣本封閉式建庫平臺,儀器內(nèi)置溫控模塊、移液模塊等多種功能模塊,搭配已預(yù)分裝試劑的試劑卡盒能快速完成單樣本的文庫制備。單樣本封閉式建庫平臺最大的優(yōu)勢在于操作簡便,手工操作只有樣品添加的過程,并且有效避免交叉污染的出現(xiàn)。但此類儀器的問題也很明顯,每次僅能構(gòu)建一個(gè)樣本文庫,無法實(shí)現(xiàn)大樣本建庫需求。
Auto-NGS 100R 是一款全自動、高通量的專為文庫制備設(shè)計(jì)開發(fā)的自動化系統(tǒng),可一次性滿足24個(gè)樣本文庫同時(shí)構(gòu)建。僅需放入制備的核酸,即可短時(shí)間內(nèi)獲得文庫產(chǎn)物。提升構(gòu)建效率的同時(shí),也保障了樣本的準(zhǔn)確性和批次穩(wěn)定性。并且操作軟件圖形化設(shè)計(jì),操作邏輯清晰,大大降低了使用難度。
手動制備與工作站制備的差異
維度\方式 |
手動制備 |
Auto-NGS 100R |
周轉(zhuǎn)時(shí)間 |
制備8個(gè)文庫大約需要8h |
僅需20min左右準(zhǔn)備試劑、編程序,大約3.5h即可完成24個(gè)文庫構(gòu)建 |
處理通量 |
理想情況下一天可處理8個(gè)樣品左右 |
一次可制備1-24個(gè)樣品,無需值守 |
可靠性 |
結(jié)果有高度多變性 |
可重復(fù)性有所增加 |
成本效益 |
手工制備導(dǎo)致的錯(cuò)誤將浪費(fèi)時(shí)間和資源 |
可降低污染風(fēng)險(xiǎn) |
利用Auto-NGS 100R制備,耗材裝載、試劑準(zhǔn)備到完成建庫僅需手動介入20min左右,相較傳統(tǒng)手工制備不僅提升效率,在獲得的結(jié)果方面也更為優(yōu)秀(圖4)。
圖4:基于手動和自動化制備方式下的濃度與片段分析
奧盛Auto-NGS 100R文庫制備儀
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