培養(yǎng)NK-92依賴性自然殺傷細(xì)胞系的注意事項
NK-92細(xì)胞是一種白細(xì)胞介素-2 (IL-2) 依賴性自然殺傷細(xì)胞系， 1992年建立于一名患有快速進(jìn)展性非霍奇金淋巴瘤的 50 歲白人男性的外周血單核細(xì)胞。NK-92細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。幾十年來，它在癌癥治療、免疫學(xué)和毒理學(xué)等研究領(lǐng)域中發(fā)揮著重要作用。
然而，作為一種懸浮生長且有著諸多特性的細(xì)胞系，想養(yǎng)好NK-92細(xì)胞就需要注意很多小的細(xì)節(jié)，否則很可能耗費大量時間卻發(fā)現(xiàn)它“一點不給面子”。以下幾招是“馴服”它的“秘籍‘，不要錯過哦！
白細(xì)胞介素-2 (IL-2)質(zhì)量
白細(xì)胞介素-2 (IL-2)是配制NK-92細(xì)胞完全培養(yǎng)基的必要組成成分。NK-92細(xì)胞的增殖依賴高質(zhì)量的IL-2，如果IL-2的質(zhì)量不好或者濃度不夠，會讓細(xì)胞增殖受限甚至完全凋亡，這一點是重中之重哦！除此之外，對完全培養(yǎng)基進(jìn)行分裝也是必要的，可以減少IL-2及其它有效成分的降解。
秘密武器--沉降法
NK-92是種非常“團(tuán)結(jié)“的細(xì)胞，它們成長過程中需要”互幫互助“，一旦細(xì)胞個體脫離”團(tuán)體“，將會停止增殖直至死亡。所以，在換液、傳代及凍存過程中，不建議使用離心的方法去除舊的培養(yǎng)基（離心重懸過程會打散部分細(xì)胞團(tuán)）。建議在換液分瓶或者凍存時采用”沉降法“—將培養(yǎng)基連同細(xì)胞團(tuán)輕柔轉(zhuǎn)移至一個15ML尖底離心管中，靜置10-20分鐘，待細(xì)胞團(tuán)沉降至離心管底部后小心去除舊的培養(yǎng)基（在不吸到細(xì)胞團(tuán)的情況下盡量多地去除舊培養(yǎng)基）。如此操作，可以最大限度保留細(xì)胞團(tuán)，維持細(xì)胞活力。
換液頻率
復(fù)蘇初期細(xì)胞團(tuán)小而少，活力較差。因此，避免頻繁換液對細(xì)胞恢復(fù)活力是很重要的。在復(fù)蘇后的一周內(nèi)只需換1-2次液，同樣需采用上文提到的“沉降法“，除此之外，第一次換液可”半換液“—即細(xì)胞沉降后保留靠近底部的1/2培養(yǎng)基，補(bǔ)加等量新鮮培養(yǎng)基即可。待細(xì)胞活力恢復(fù)，增殖旺盛時，視細(xì)胞密度及培養(yǎng)基顏色每2-3天換液一次。
傳代及凍存操作要點
傳代及凍存操作需要細(xì)胞處在增殖旺盛的“對數(shù)生長期“，并且達(dá)到一定密度。對于NK-92這種聚團(tuán)懸浮細(xì)胞來說，密度包含了兩個方面--細(xì)胞團(tuán)在培養(yǎng)基中的密度和細(xì)胞團(tuán)中聚集個體數(shù)量的多少。
如果細(xì)胞團(tuán)數(shù)量不多，但是細(xì)胞團(tuán)本身比較大（當(dāng)在鏡下觀察到細(xì)胞團(tuán)中心發(fā)暗），既不適合傳代又必須處理：可在沉降重懸后輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)2-3次，將大的細(xì)胞團(tuán)分散呈小的細(xì)胞團(tuán)以使細(xì)胞能正常獲取營養(yǎng)繼續(xù)增殖。如果忽略該操作，將可能導(dǎo)致細(xì)胞團(tuán)短時間內(nèi)解離，細(xì)胞大面積死亡。
如果同時滿足以上關(guān)于密度的兩方面要求，即可進(jìn)行傳代或凍存：沉降細(xì)胞后輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)2-3次后分瓶或加入凍存液重懸、凍存。
細(xì)胞碎片很多怎么辦？
由于細(xì)胞特性，細(xì)胞碎片的出現(xiàn)在培養(yǎng)NK-92的過程中是常見且正常的，數(shù)量少時不會影響細(xì)胞增殖。如果數(shù)量非常多，使用咱們的“秘密武器“--沉降法進(jìn)行一次換液就可以啦！大量碎片會懸浮在上清中被去除掉。
給大家推薦一下NK-92的完全培養(yǎng)基：貨號：ZQ-801，主要成分 ：MEM α基礎(chǔ)培養(yǎng)基；12.5%heat-inactivated horse serum，12.5%FBS（AU0600），1%PS，0.2mMinositol，0.1mM β-Mer，0.02mMfolic acid，100-200U/mL recombinant IL-2。
以上就是養(yǎng)好NK-92的“武功秘籍‘啦！希望大家都能養(yǎng)出”白白胖胖“的NK-92細(xì)胞哦！
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