A12：主要看類(lèi)器官的干性，干性比較好可以傳20代以上；凍存液需要類(lèi)器官專(zhuān)用的無(wú)血清凍存液。

 

A13：主要看類(lèi)器官生長(zhǎng)的情況，一般是100-200um.如果類(lèi)器官初始體積就比較大，直徑會(huì)更大一些。

 

A14：原理上是可以的，把基質(zhì)膠鋪薄一些讓其貼壁，再把培養(yǎng)基換成常規(guī)血清培養(yǎng)基。

 

A15：因?yàn)樵�代�?xì)胞是單一細(xì)胞系，一些增殖的基因會(huì)起到抑制作用，但是類(lèi)器官中是有干細(xì)胞的，每一代的類(lèi)器官中都有一些具有干性的原代祖細(xì)胞，所以可以一直傳代，而且類(lèi)器官的培養(yǎng)基可以保持細(xì)胞干性，抑制其分化能力。

 

A16：一種是觀(guān)察明場(chǎng)圖片，另外就是終點(diǎn)法，像比較常見(jiàn)的CCK8、ATP細(xì)胞活性檢測(cè)、活死染色法也可以。

 

A17：比較常見(jiàn)的是CCK8檢測(cè)、ATP細(xì)胞活性檢測(cè)、活死染色法。

 

A18：建議3-5代是比較好的。

 

A19：常規(guī)顯微鏡4倍鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)即可；另外可以用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。

 

A20：200-300um;建議是在加藥后120小時(shí)以上。

 

A21：這種屬于腫瘤球構(gòu)建。

 

A22：有專(zhuān)用的類(lèi)器官消化液，還可以借助一些機(jī)械的消化手段，一般是1-2min,千萬(wàn)不要用胰酶消化。

 

A23：用我們愛(ài)必信的消化液是10-15min,常規(guī)文獻(xiàn)中的要根據(jù)不同組織類(lèi)型去判斷。

 

A24：可以的，但是純度是不一樣的。

 

A25：藥物并一定要滲入到深層，作用一部分的就會(huì)起作用，因?yàn)轭?lèi)器官之間是相互作用的，這一點(diǎn)區(qū)別于腫瘤球，主要是腫瘤球中間是沒(méi)有縫隙的。

 

A26：差別比較大的，每個(gè)類(lèi)器官的形態(tài)都是有一定的區(qū)別。

 

A27：建議每2天拍一次，培養(yǎng)過(guò)程多進(jìn)行觀(guān)察，有條件可以每日觀(guān)察。

 

A28：每個(gè)孔建議是50個(gè)類(lèi)器官，因?yàn)轭?lèi)器官?zèng)]有辦法計(jì)數(shù)，所以每個(gè)孔多少還是會(huì)有差距。

 

A29：不建議這樣操作，建議把類(lèi)器官懸浮在緩沖液或者培養(yǎng)基中進(jìn)行染色。

 

A30：是正常的。因?yàn)榉卧陂L(zhǎng)過(guò)程是會(huì)有一個(gè)M1型到M2型的轉(zhuǎn)化的。

 

A31：不同廠(chǎng)家離心力不同，提議自己摸索實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)速，適當(dāng)提高。