1. 百螢Annexin V-iFluor 700標(biāo)記簡(jiǎn)介及應(yīng)用
Annexin V是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（PS）高親和力特異性結(jié)合。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。用標(biāo)記了熒光素的Annexin V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
Annexin V-iFluor 700標(biāo)記是美國(guó)AAT Bioquest研發(fā)的用于檢測(cè)細(xì)胞功能的探針，膜聯(lián)蛋白是鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族。 它們富含真核生物，屬于參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的普遍存在的細(xì)胞質(zhì)蛋白家族。 膜聯(lián)蛋白V的優(yōu)先結(jié)合配偶體是磷脂酰絲氨酸（PS），其通常保持在細(xì)胞膜的內(nèi)葉（細(xì)胞質(zhì)側(cè)）。 在細(xì)胞凋亡中，PS被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。 磷脂酰絲氨酸在細(xì)胞表面上的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡的初始/中間階段的通用指示，并且可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測(cè)到。 我們的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物是一組監(jiān)測(cè)細(xì)胞功能的工具，旨在通過測(cè)量磷脂酰絲氨酸的易位來監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。
膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物在Ca2+存在下與凋亡細(xì)胞表面上的PS結(jié)合，它也可以通過壞死細(xì)胞膜或死細(xì)胞并與細(xì)胞內(nèi)部的PS結(jié)合。 因此，我們建議將細(xì)胞不可滲透的核染色與膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物結(jié)合使用，以區(qū)分死細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。 
2. Annexin V-iFluor 700標(biāo)記參數(shù)
E x (nm)        690
E m (nm)      713
分 子 量      ～36000
溶    劑      Water
存儲(chǔ)條件      在零下15度以下保存，避免光照
3. 適用儀器
（1）流式細(xì)胞儀
E x:640nm
E m:730/45nm
通道:Alexa Flour-700通道
（2）熒光顯微鏡
     推薦孔板：黑色透明底板
4. 數(shù)據(jù)分析
下圖是使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細(xì)胞凋亡中的結(jié)合活性的實(shí)例。 在活的非凋亡細(xì)胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450檢測(cè)非誘導(dǎo)細(xì)胞中的先天性細(xì)胞凋亡，其通常為所有細(xì)胞的2-6％。 在凋亡細(xì)胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結(jié)合，磷脂酰絲氨酸位于細(xì)胞膜的外部小葉上，導(dǎo)致染色強(qiáng)度增加。
 
圖1.在Jurkat細(xì)胞中檢測(cè)膜聯(lián)蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰絲氨酸的結(jié)合活性。 將Jurkat細(xì)胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中不用（藍(lán)色）或用1μM星形孢菌素（紅色）處理5小時(shí)，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分鐘。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細(xì)胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測(cè)量膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450的熒光強(qiáng)度。