產(chǎn)品概述 product description
酵母活性檢測試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍快速高靈敏度檢測酵母活性的比色檢測產(chǎn)品。 AlamarBlue是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)酵母的代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號。這種測定是基于具有代謝活性的細胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。 受損和無活性細胞具有較低的天然代謝活性，因此對應(yīng)的信號較低。  AlamarBlue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，其吸收峰為530-560nm，而散射峰為590nm。在酵母細胞增殖過程中，細胞內(nèi)處于還原環(huán)境。進入酵母細胞內(nèi)的活性檢測染料被代謝中間體及細胞色素類還原后釋放到酵母細胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。最后用普通分光光度計或熒光光度計進行檢測，吸光度和熒光強度與活性酵母細胞數(shù)成正比。染料經(jīng)過驗證安全無毒，可以用于酵母細胞活性和酵母細胞增殖的定量分析細胞毒性研究。 AlamarBlue的無毒特性使酵母細胞可長期暴露于這種染料，因此可隨時間進行測量或進行終點測量。 AlamarBlue法采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測酵母細胞的增生狀態(tài)。由于AlamarBlue對酵母細胞無毒、無害，不影響細胞的蛋白質(zhì)合成與分泌等活性，因此可以對同一批酵母細胞的增生狀態(tài)進行連續(xù)觀察和進一步的實驗觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾酵母細胞正常代謝的特點。

保存溫度
2-8℃避光

注意事項
1.長期不用可以-20℃保存。需要長期保存可以分裝后-20℃保存，避免反復凍融。
2.凍存后融解時注意重新混勻。

有效期
一年

檢測方法
酶標儀或分光光度計

適用樣本
酵母

產(chǎn)品特點
1.使用方便：僅使用單一試劑；
2.靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好，線性范圍更寬；
3.結(jié)果穩(wěn)定：試劑本身穩(wěn)定性高，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠；
4.無需放射性同位素和有機溶劑，對微生物毒性低；
5.適合于高通量藥物篩選。

產(chǎn)品應(yīng)用
酶標儀或分光光度計

儀器準備
1.帶有450nm濾光片的酶標儀 2. CO2培養(yǎng)箱

試劑準備
1.PBS 2.HBSS
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項
1.正式實驗前，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入Alamar Blue試劑后的培養(yǎng)時間。
2.整個過程均應(yīng)為無菌操作，因為微生物污染物同樣可以還原檢測試劑而影響實驗結(jié)果。
3.注意接種細胞濃度和加入檢測試劑后孵育時間。細胞濃度過高或孵育時間過長，會導致繼發(fā)性還原反應(yīng)，產(chǎn)生無色和熒光消失。
4.孵育時，須避光。
5.本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度檢測，但熒光的靈敏度高，實驗誤差小，推薦使用熒光檢測。

使用方法
1. 收集待檢測的酵母細胞。
2. 用PBS或生理鹽水洗滌酵母細胞2次。
3. 將酵母細胞用PBS重懸，調(diào)整細胞懸液濃度為1x107/ml。
4. 96孔板中每孔加入200微升細胞懸液。將AlamarBlue活性檢測試劑于潔凈工作臺內(nèi)按10微升/孔加入微孔板中，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2－12小時，液體顏色部分出現(xiàn)由藍變?yōu)榉奂t為止（如采用熒光分光光度法，只需孵育0.5－6小時）；
5. 在570nm測定吸光度，參考波長600nm。如無此濾光片， 可用565 nm 和 610 nm的濾光片替代。
6. 也可用熒光分光光度法檢測熒光強度，激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。