實(shí)驗(yàn)室獲取高品質(zhì)血清方法指引
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。
血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：
1. 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml
2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行
3. 血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl
4. pH。國(guó)產(chǎn)血清、大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，根據(jù)PH的高低可用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源
5. 微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無(wú)法過(guò)濾，很難徹底清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一。
在實(shí)際篩選時(shí)，主要從血清外觀和實(shí)驗(yàn)操作時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行。
一、 從外觀上：
1. 顏色：根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)樘ヅＱ迥δ懿�，紅細(xì)胞容易破裂；
2. 澄清度：高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有影響，沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān)，在實(shí)驗(yàn)操作中可能會(huì)對(duì)細(xì)胞觀察產(chǎn)生影響。
二、從性能上：
1. 細(xì)胞形態(tài)，在進(jìn)行血清篩選時(shí)首先觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化，以及觀察貼壁細(xì)胞的貼壁情況，細(xì)胞在不同血清培養(yǎng)中可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)上的差異；
2. 倍增時(shí)間，一般情況下會(huì)選擇倍增時(shí)間短的血清，值得注意的是血清的影響會(huì)傳至5代，在進(jìn)行測(cè)試時(shí)，最好培養(yǎng)五代后進(jìn)行計(jì)倍增時(shí)間的計(jì)算；
3. 克隆形成率，測(cè)試時(shí)一般選50、100、200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行平板克隆測(cè)試，平均5d左右換一次液，兩周后染色計(jì)數(shù)，對(duì)比克隆形成情況。
血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：
1. 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml
2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行
3. 血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl
4. pH。國(guó)產(chǎn)血清、大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，根據(jù)PH的高低可用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源
5. 微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無(wú)法過(guò)濾，很難徹底清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一。
在實(shí)際篩選時(shí)，主要從血清外觀和實(shí)驗(yàn)操作時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行。
一、 從外觀上：
1. 顏色：根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)樘ヅＱ迥δ懿�，紅細(xì)胞容易破裂；
2. 澄清度：高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有影響，沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān)，在實(shí)驗(yàn)操作中可能會(huì)對(duì)細(xì)胞觀察產(chǎn)生影響。
二、從性能上：
1. 細(xì)胞形態(tài)，在進(jìn)行血清篩選時(shí)首先觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化，以及觀察貼壁細(xì)胞的貼壁情況，細(xì)胞在不同血清培養(yǎng)中可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)上的差異；
2. 倍增時(shí)間，一般情況下會(huì)選擇倍增時(shí)間短的血清，值得注意的是血清的影響會(huì)傳至5代，在進(jìn)行測(cè)試時(shí)，最好培養(yǎng)五代后進(jìn)行計(jì)倍增時(shí)間的計(jì)算；
3. 克隆形成率，測(cè)試時(shí)一般選50、100、200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行平板克隆測(cè)試，平均5d左右換一次液，兩周后染色計(jì)數(shù)，對(duì)比克隆形成情況。
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