細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)具體操作分享
細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理：當(dāng)待測(cè)細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí)，通過測(cè)定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。
具體操作：
一.準(zhǔn)備工作：
取一瓶傳代的細(xì)胞，按照《傳代細(xì)胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細(xì)胞，待長(zhǎng)成單層后以被使用。
二.細(xì)胞懸液制備：
細(xì)胞懸液的制備方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶液），吹打制成待測(cè)細(xì)胞懸液。
三.細(xì)胞計(jì)數(shù)：
1.蓋好蓋玻片：取一套血球計(jì)數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上。
2.制備計(jì)數(shù)用的細(xì)胞懸液：用吸管吸5滴細(xì)胞懸液到一離心管中，加入5滴臺(tái)盼藍(lán)染液（0.4％）或苯胺黑，活細(xì)胞不會(huì)被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細(xì)胞和死細(xì)胞。
3.將細(xì)胞懸液滴入計(jì)數(shù)板：將待測(cè)細(xì)胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。
4.統(tǒng)計(jì)四個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動(dòng)計(jì)數(shù)板，當(dāng)看到鏡中出現(xiàn)計(jì)數(shù)方格后，數(shù)出四角的四個(gè)大鉻（每個(gè)大格含有16個(gè)中鉻）中沒有被染液染上色的細(xì)胞數(shù)目。
5.計(jì)算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù):按照下面公式計(jì)算細(xì)胞密度：
（細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml＝ （ 四個(gè)大格子細(xì)胞數(shù)/4) ×2×104
說明：公式中除以4因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。
公式中乘以2因?yàn)榧?xì)胞懸液于染液是1：1稀釋。
公式中乘以104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為：
1.0mm（長(zhǎng)）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3
四.細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)：
1.進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于104個(gè)/ml，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中；
2.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。
3.取樣計(jì)數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其時(shí)多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混勻，以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確；
4. 數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí)，只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞壓在格線上時(shí)，則只計(jì)上線，不計(jì)下線，只計(jì)右線，不計(jì)左線。
5. 操作時(shí)，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計(jì)數(shù)。
五.初學(xué)者易犯的錯(cuò)誤：
1. 計(jì)數(shù)前未將待測(cè)懸液吹打均勻。
2. 滴入細(xì)胞懸液時(shí)蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。
3. 滴入懸液時(shí)的量太多，至使細(xì)胞懸液流入旁邊的槽中。
六.本實(shí)驗(yàn)特殊試劑的配制：
4％臺(tái)盼藍(lán)母液：稱取4克臺(tái)盼藍(lán)，加入少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100毫升，用濾紙過濾，4℃保存。
使用液：使用時(shí)，用PBS稀釋母液至0.4％即可。
具體操作：
一.準(zhǔn)備工作：
取一瓶傳代的細(xì)胞，按照《傳代細(xì)胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細(xì)胞，待長(zhǎng)成單層后以被使用。
二.細(xì)胞懸液制備：
細(xì)胞懸液的制備方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶液），吹打制成待測(cè)細(xì)胞懸液。
三.細(xì)胞計(jì)數(shù)：
1.蓋好蓋玻片：取一套血球計(jì)數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上。
2.制備計(jì)數(shù)用的細(xì)胞懸液：用吸管吸5滴細(xì)胞懸液到一離心管中，加入5滴臺(tái)盼藍(lán)染液（0.4％）或苯胺黑，活細(xì)胞不會(huì)被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細(xì)胞和死細(xì)胞。
3.將細(xì)胞懸液滴入計(jì)數(shù)板：將待測(cè)細(xì)胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。
4.統(tǒng)計(jì)四個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動(dòng)計(jì)數(shù)板，當(dāng)看到鏡中出現(xiàn)計(jì)數(shù)方格后，數(shù)出四角的四個(gè)大鉻（每個(gè)大格含有16個(gè)中鉻）中沒有被染液染上色的細(xì)胞數(shù)目。
5.計(jì)算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù):按照下面公式計(jì)算細(xì)胞密度：
（細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml＝ （ 四個(gè)大格子細(xì)胞數(shù)/4) ×2×104
說明：公式中除以4因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。
公式中乘以2因?yàn)榧?xì)胞懸液于染液是1：1稀釋。
公式中乘以104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為：
1.0mm（長(zhǎng)）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3
四.細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)：
1.進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于104個(gè)/ml，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中；
2.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。
3.取樣計(jì)數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其時(shí)多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混勻，以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確；
4. 數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí)，只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞壓在格線上時(shí)，則只計(jì)上線，不計(jì)下線，只計(jì)右線，不計(jì)左線。
5. 操作時(shí)，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計(jì)數(shù)。
五.初學(xué)者易犯的錯(cuò)誤：
1. 計(jì)數(shù)前未將待測(cè)懸液吹打均勻。
2. 滴入細(xì)胞懸液時(shí)蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。
3. 滴入懸液時(shí)的量太多，至使細(xì)胞懸液流入旁邊的槽中。
六.本實(shí)驗(yàn)特殊試劑的配制：
4％臺(tái)盼藍(lán)母液：稱取4克臺(tái)盼藍(lán)，加入少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100毫升，用濾紙過濾，4℃保存。
使用液：使用時(shí)，用PBS稀釋母液至0.4％即可。
- 堿性固綠染色液說明書
- 全球干細(xì)胞臨床研究現(xiàn)狀與展望
- 造血干細(xì)胞與公認(rèn)單能干細(xì)胞的差異
- 干細(xì)胞的種類及在再生醫(yī)學(xué)中的作用
- 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)造成“黑膠蟲”及“黑點(diǎn)”污染的綜合分析與解決辦法
- 原代細(xì)胞分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)盤點(diǎn)
- 動(dòng)脈粥樣硬化(AS)進(jìn)程中脂質(zhì)代謝與巨噬細(xì)胞極化的相互作用關(guān)系研究
- T細(xì)胞中免疫檢查點(diǎn)受體信號(hào)通路的特征及傳導(dǎo)機(jī)制
- GelNEST™基質(zhì)膠助力應(yīng)對(duì)貿(mào)易壁壘下的科研不確定性
- 拉曼技術(shù)在未來醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用醫(yī)工融合沙龍成功舉行
- 博鷺騰試劑2025首次大促銷開啟，超多優(yōu)惠等你來
- 中喬新舟開學(xué)優(yōu)惠:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)套裝980元,培養(yǎng)基折扣等
- 中喬新舟限時(shí)促銷：買細(xì)胞就送支原體檢測(cè)試劑盒
- 華威中儀試劑盒年末限時(shí)優(yōu)惠來襲，儲(chǔ)值享好禮
- 美德聲推出新品重組細(xì)胞系用于生產(chǎn)單克隆血型試劑
- 百螢小麥胚芽凝集素探針染料8折優(yōu)惠，買即贈(zèng)鼠標(biāo)墊
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com