酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）競爭法解說
酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是最常用的標記免疫分析技術(shù)之一。它基于一種酶標記抗體，能夠檢測固定在96孔或384孔酶標板上的抗原，加入的底物可以產(chǎn)生與原始樣品中存在的抗原量相關(guān)的顏色變化或光信號。這是一種簡單而快速的技術(shù)，用于檢測附著在固體表面的抗體或抗原。
ELISA競爭法預先將抗原包被在固相載體上，并加入酶標記的特異性抗體。實驗時，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原與預先包被在固相載體上的抗原競爭結(jié)合酶標抗體；如果待檢測物是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標抗體競爭結(jié)合包被在固相載體上的抗原。通過洗滌洗掉被競爭結(jié)合的酶標抗體，最后加底物顯色。需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。其主要優(yōu)點在于可檢測不純的樣品，且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高，但存在整體敏感性和專一性較差的問題。
在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應最為敏感。
競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
1. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。
測得A值后，先計算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（N-P）必須大于一個特定的數(shù)值（例如0.300）,試驗才有效。3個陰性對照A值均應小于2.000，而且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個陰性對照重新計算×NCX；如有2個陰性對照A超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標本A值≤陽性判定值的反應為陽性，A＞陽性判定值的反應為陰性。
2. 抑制率法
抑制率表示標本在競爭結(jié)合中標本對陰性反應顯色的抑制程度，按下式計算：
抑制率（%）= ELISA試劑盒（陰性對照A值-標本A值）×100%/陰性對照A值，一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。
ELISA競爭法預先將抗原包被在固相載體上，并加入酶標記的特異性抗體。實驗時，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原與預先包被在固相載體上的抗原競爭結(jié)合酶標抗體；如果待檢測物是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標抗體競爭結(jié)合包被在固相載體上的抗原。通過洗滌洗掉被競爭結(jié)合的酶標抗體，最后加底物顯色。需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。其主要優(yōu)點在于可檢測不純的樣品，且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高，但存在整體敏感性和專一性較差的問題。
在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應最為敏感。
競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
1. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。
測得A值后，先計算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（N-P）必須大于一個特定的數(shù)值（例如0.300）,試驗才有效。3個陰性對照A值均應小于2.000，而且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個陰性對照重新計算×NCX；如有2個陰性對照A超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標本A值≤陽性判定值的反應為陽性，A＞陽性判定值的反應為陰性。
2. 抑制率法
抑制率表示標本在競爭結(jié)合中標本對陰性反應顯色的抑制程度，按下式計算：
抑制率（%）= ELISA試劑盒（陰性對照A值-標本A值）×100%/陰性對照A值，一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。
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