細(xì)胞培養(yǎng)中生物污染各類(lèi)型特征介紹
細(xì)胞培養(yǎng)又稱(chēng)細(xì)胞克隆技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)是指在人工創(chuàng)造的與體內(nèi)環(huán)境相似的條件下（比如適宜的溫度、pH，以及一定的營(yíng)養(yǎng)），使細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種技術(shù)。
根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)的不同又可分為貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)。
1.傳代培養(yǎng)：細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中。培養(yǎng)細(xì)胞的“一代”，不表示細(xì)胞分裂一次，而是指培養(yǎng)細(xì)胞從接種到再次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)的過(guò)程。在一次傳代培養(yǎng)中，細(xì)胞能倍增3-6次。
2.原代培養(yǎng)：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱(chēng)為原代培養(yǎng)。
3.貼壁培養(yǎng)：必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。多為各種實(shí)體瘤細(xì)胞。
4.懸浮培養(yǎng)：于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)，不需要貼附于支持物表面。多為各種造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染。
細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特征如下：
1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。
2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,原體感染,國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè),而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一.而且它不能用過(guò)濾的辦法除去.支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是慢慢死去。
3、黑膠蟲(chóng)：可以穿透濾膜,也可以通過(guò)空氣傳播,低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會(huì)太影響,細(xì)胞還是可以用的.常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無(wú)明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無(wú)明顯變化,可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類(lèi)似現(xiàn)象.對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響,在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失,除更換血清外無(wú)須特殊處理。
4、真菌：一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物.真菌生長(zhǎng)的比較慢,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。
5、原蟲(chóng)：培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,輕微活動(dòng),細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢,而且細(xì)胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細(xì)胞不透亮.他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng).這種共生是非常普遍的,但他們的數(shù)量小,細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng),只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng),最終形成惡性循環(huán)。
6.病毒：組織細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,如果沒(méi)有除去潛在的病毒,就會(huì)產(chǎn)生病毒污染.目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒.盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
7、非同種細(xì)胞污染 ：即是細(xì)胞交叉污染,由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi),往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染.目前,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。
根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)的不同又可分為貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)。
1.傳代培養(yǎng)：細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中。培養(yǎng)細(xì)胞的“一代”，不表示細(xì)胞分裂一次，而是指培養(yǎng)細(xì)胞從接種到再次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)的過(guò)程。在一次傳代培養(yǎng)中，細(xì)胞能倍增3-6次。
2.原代培養(yǎng)：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱(chēng)為原代培養(yǎng)。
3.貼壁培養(yǎng)：必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。多為各種實(shí)體瘤細(xì)胞。
4.懸浮培養(yǎng)：于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)，不需要貼附于支持物表面。多為各種造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染。
細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特征如下：
1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。
2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,原體感染,國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè),而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一.而且它不能用過(guò)濾的辦法除去.支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是慢慢死去。
3、黑膠蟲(chóng)：可以穿透濾膜,也可以通過(guò)空氣傳播,低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會(huì)太影響,細(xì)胞還是可以用的.常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無(wú)明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無(wú)明顯變化,可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類(lèi)似現(xiàn)象.對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響,在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失,除更換血清外無(wú)須特殊處理。
4、真菌：一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物.真菌生長(zhǎng)的比較慢,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。
5、原蟲(chóng)：培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,輕微活動(dòng),細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢,而且細(xì)胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細(xì)胞不透亮.他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng).這種共生是非常普遍的,但他們的數(shù)量小,細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng),只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng),最終形成惡性循環(huán)。
6.病毒：組織細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,如果沒(méi)有除去潛在的病毒,就會(huì)產(chǎn)生病毒污染.目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒.盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
7、非同種細(xì)胞污染 ：即是細(xì)胞交叉污染,由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi),往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染.目前,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。
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