sphereONE與Incucyte創(chuàng)新工作流程在助力細(xì)胞模型藥物研究中的應(yīng)用
sphereONE創(chuàng)新的球狀體分析工作流程
「 介紹」
復(fù)雜的三維（3D）體外細(xì)胞模型，如球體、腫瘤類器官和類器官，已成為基礎(chǔ)生理學(xué)研究、藥物發(fā)現(xiàn)和個(gè)性化醫(yī)療的關(guān)鍵。為了確保使用3D細(xì)胞模型進(jìn)行藥物毒性和效率測(cè)試的可重復(fù)性，需要能夠監(jiān)測(cè)球體隨時(shí)間變化的反應(yīng)的自動(dòng)化系統(tǒng)。使用傳統(tǒng)方法生成的球體在大小和功能上存在差異，這會(huì)影響其藥物反應(yīng)，從而影響檢測(cè)的可重復(fù)性。在本研究中，引入了一種創(chuàng)新的工作流程，以展示標(biāo)準(zhǔn)化和單獨(dú)3D細(xì)胞模型的藥理學(xué)應(yīng)用。該工作流程結(jié)合了用于分離和分選球體細(xì)胞的spheroONE和以及Incucyte®活細(xì)胞分析系統(tǒng)用于連續(xù)藥物反應(yīng)監(jiān)測(cè)。在這里，我們以表達(dá)GFP的人胚胎腎（HEK）球形細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性化合物康普托西汀的處理反應(yīng)為模型，展示了spheroONE + Incucyte工作流程在藥物毒性測(cè)試中的適用性。
結(jié)果表明, spheroONE和Incucyte®活細(xì)胞分析系統(tǒng)的先進(jìn)技術(shù)之間的協(xié)同作用，為研究人員提供了一種強(qiáng)有力的工具，以提高藥物測(cè)試的穩(wěn)健性和通量，并加速科學(xué)發(fā)現(xiàn)。
工作流程概述
將HEK293細(xì)胞播種到球形微腔板（圖 1A）中。細(xì)胞播種三天后,收獲球狀體（圖1B）并將其裝載到spheroONE中（圖1C）。
spheroONE被用來(lái)將一個(gè)且僅一個(gè)HEK球狀體分離并分配到96孔ULA板的每一個(gè)獨(dú)立孔中（尺寸范圍190 - 260 µm)（圖1D）。
分離后,將ULA板放入Incucyte® 活細(xì)胞分析系統(tǒng)中進(jìn)行自動(dòng)細(xì)胞分析。
活細(xì)胞分析系統(tǒng)，對(duì) 96 個(gè)分離的球形細(xì)胞進(jìn)行 t=0 自動(dòng)成像。
然后在不同的孔中加入不同濃度（0.1 至 1000 nM）的喜樹堿（圖 1E）。
使用 Incucyte® 活細(xì)胞分析系統(tǒng)每 6 小時(shí)監(jiān)測(cè)一次球狀體對(duì)喜樹堿的反應(yīng)，持續(xù)7天（圖1F）。
技術(shù)
spheroONE 特征
- 高達(dá)100%的單細(xì)胞聚集體分離準(zhǔn)確性。
- 適用于直徑范圍在100到600微米的細(xì)胞聚集體。
- 溫和的噴點(diǎn)技術(shù)可保持細(xì)胞的完整性和活力。
- 與手動(dòng)分離相比，細(xì)胞碎片去除率更高。
- 兼容標(biāo)準(zhǔn)多孔板（如96孔板和384孔板）和任何定制的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。
- 可目測(cè)樣品并記錄分離出的聚集體圖像。
Incucyte® 活細(xì)胞分析系統(tǒng)的特點(diǎn)：
- 簡(jiǎn)單、靈活的樣品制備，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試協(xié)議減少故障排除。隨用隨取、用戶友好的引導(dǎo)式實(shí)驗(yàn)設(shè)置。
- 兼容 600 多種容器。
- 獲取并查看隨時(shí)間變化的圖像，多達(dá)五個(gè)熒光通道與高清相位相結(jié)合。血管視圖可快速查看結(jié)果。
- 實(shí)時(shí)分析。高效、可重復(fù)的圖像分析。
- 強(qiáng)大的圖像和動(dòng)力學(xué)測(cè)量（包括IC50）可視化功能。
- 自動(dòng)監(jiān)測(cè)和量化腫瘤球體生長(zhǎng)和死亡的集成解決方案。
spheroONE分離提供高度均一且無(wú)碎片的群體，從而促進(jìn)使用Incucyte®活細(xì)胞分析系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)和準(zhǔn)確的目標(biāo)檢測(cè)及可重復(fù)的檢測(cè)（圖2）。
圖2. 手動(dòng)移液（左）與spheroONE（右）分離的球體。(A) 使用 Incucyte® 活細(xì)胞分析系統(tǒng)的全板圖像和 (B) 明視野平均物體面積檢測(cè)。
結(jié)論
球形體的藥物反應(yīng)是通過(guò)大�。鲌�(chǎng)對(duì)象平均面積）和熒光強(qiáng)度（最大明場(chǎng)綠色平均強(qiáng)度）來(lái)測(cè)量。
利用 Incucyte® 活細(xì)胞成像和分析技術(shù)，可對(duì)分離的HEK球形體進(jìn)行7天的實(shí)時(shí)跟蹤和分析（圖 3）。
圖3. 使用Incucyte® Live-Cell Imaging and Analysis軟件跟蹤喜樹堿處理期間HEK-GFP球體的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)。圖像以10倍放大倍率拍攝。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，n = 7。
在最高濃度的喜樹堿（1000 nM）下，球體生長(zhǎng)在1.5天后完全被抑制（圖4A）。在中等濃度（50至100 nM）下，生長(zhǎng)在第4天停止。相比之下，暴露于較低濃度（0.1至10 nM）的球體在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中持續(xù)生長(zhǎng)，盡管它們的生長(zhǎng)速率與喜樹堿濃度的增加成反比（圖4B）�；诘�7天的球體生長(zhǎng)或GFP表達(dá)計(jì)算的中位有效濃度（EC50）分別為9.06 nM（圖4C）和13.6 nM（圖4D）。
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