免疫組織化學方法成功與否關鍵在于抗原決定簇的保存和暴露.組織經(jīng)甲醛固定.甲醛的醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián),使決定簇的構像改變.從而影響檢測蛋白表達.要充分暴露抗原決定簇，通常用到抗原修復鍋Antigen Retriever。強烈推薦EMS最具有競爭力的一款產(chǎn)品，適于甲醛固定的組織，經(jīng)石蠟包埋后進行免疫染色前的處理，配合特別的抗原修復緩沖液確保你得到最搞質量的免疫染色效果。

· 一次可以在6中不同緩沖液中運行，進行抗原暴露

· 僅暴露抗原決定簇，不損傷組織的形態(tài)

· 實驗結果穩(wěn)定，結果重現(xiàn)性高

· 系列的玻片在獨立環(huán)境中經(jīng)過處理

 

抗原修復鍋怎樣工作？

看上去，抗原修復鍋似我們烹飪的高壓鍋。這是一款功能獨特的“高壓鍋”，主要用于抗原暴露的工作，主要的工作原理也是裝玻片的幾個分室可以達到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控制器來保持一定的溫度和壓力及一定的時間，這些工作參數(shù)都是經(jīng)過嚴格的科學實驗得到的數(shù)據(jù)。當達到需要的溫度，抗原修復鍋會在該溫度下保持幾分鐘，之后鍋內(nèi)玻片被冷卻2個多小時，特殊設材質的內(nèi)鍋體控制了鍋和玻片的冷卻速度。 

 

誰是受益人？

研究病理的實驗室，那里需要高質量染色照片（用來發(fā)表）的

缺乏技術人員的實驗室，學生和博士后均可以處理玻片進行組織染色，且不需要很多時間來摸索

小型病理實驗室，每天處理的玻片數(shù)量有限

樣本昂貴稀有，或如組織芯片，或如獨一無二的組織樣本，利用抗原修復鍋，簡單可靠

 

怎樣選擇一種緩沖液（Buffer）？

如果你已經(jīng)知道哪種緩沖液用在微波的某種組織抗原修復，那么用抗原修復鍋時，這種緩沖液也同時適用的機會很大。我們提供四種即用型緩沖液R-Buffer A/B/C/U，同時也提供同種更加溫和的組織處理緩沖液，我們稱之G系列，R-Buffer AG/BG/CG/UG。

 

選擇Buffer，主要考慮以下兩點：

1.  抗原的自然特性以及所選擇的抗體

抗原自身特性和抗原的位置都是首要考慮。我們建議你剛開始的時候選擇抗原表達環(huán)境的最適Buffer。以下是經(jīng)驗供大家參考：

Most of the nuclear antigens (apoptosis-related, survival-related, proliferation-related) R: Buffer A (or AG).

Cell adhesion molecules, cell membrane antigens (extracellular domain) R: Buffer A (or AG)

Cytoskeleton and cytoskeleton-associated molecules – R:Buffer A (or AG)

Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer B (or BG)

Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer C (or CG)

Most of antibodies raised against a linear peptide – R: Buffer U (or UG)

 

2.  固定液以及固定程度

 

建議的組織切片的抗原修復處理是一種針對普通的適化狀態(tài)切片。如果用來切片的組織塊沒有充分固定，或者過固定（留在福爾馬林溶液中時間過長），或者用了其它的固定液，那么，處理組織切片的流程方案需要重新修訂，最便利的辦法是選擇使用G系列緩沖液。對于過固定的材料一般推薦用U buffer或者在同一Buffer里面增加循環(huán)

 

抗原修復鍋技術參數(shù)：

Heigh	335 mm
Capacity	9 litres
Max. Instrument length	228 mm
Width.	340 mm
Net Weight	4.5 kilos
Internal chamber Dimensions (d/h)	210/230 mm
Max. Load Weight	3.0kg
Max. Single Fault Temperature	133.3°C

使用抗原修復鍋進行染色的效果示例

1.福爾馬林固定，石蠟包埋，人乙狀結腸組織切片，經(jīng)抗原修復鍋進行抗原暴露，R-Buffer C (pH 6.0)組織玻片降溫過夜，抗體MIB-1，抗原Ki-67，R-Detect HRP系統(tǒng)染色

2. 福爾馬林固定，石蠟包埋，人乙狀結腸組織切片，經(jīng)抗原修復鍋進行抗原暴露，R-Buffer A (pH 8.1)組織玻片降溫過夜，抗體#4B11，抗原CD8 (cell membrane)，R-Detect HRP系統(tǒng)染色.

 

儀器及配件的選購：

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
62700-20	Retriever 220 volt （內(nèi)含3個chamber）	1
62705-01	Slide Chamber	3/pk
62705-02	Chamber Rack	1
62705-03	Lifting Device	1
62705-05	Cord Set (Europe)	1

緩沖液的選購：

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
62706-10	R-Buffer A (10x)	250 ml
62706-11	R-Buffer B (10x)	250 ml
62706-12	R-Buffer C (10x)	250 ml
62706-13	R-Buffer U (10x)	250 ml
62707-10	R-Buffer AG (2x)	250 ml
62707-11	R-Buffer BG (2x)	250 ml
62707-12	R-Buffer CG (2x)	250 ml
62707-13	R-Buffer UG (2x)	250 ml