一入十一月，除了秋高氣爽的好天氣外，我想到的最多的便是“雙十一”了。在這個特殊的日子里，各大試劑廠商都會有一些降價促銷的活動。作為檢測細胞免疫狀態(tài)很重要的指標，多重細胞因子檢測現(xiàn)在越來越受到很多老師的歡迎。為了讓各位老師能夠更好地完成這個實驗，我們在這里獻上一篇使用Cytek全光譜流式細胞儀檢測多重細胞因子方法的福利。不久前，Cytek公司與Biolegend的國內(nèi)總代理達科為生物技術(shù)有限公司一起在上海市第一人民醫(yī)院舉辦了流式培訓班。 這次培訓班共有約60名學員，培訓的內(nèi)容包括理論指導，樣本制備，上機操作以及數(shù)據(jù)分析。理論培訓中，Cytek公司的科技總監(jiān)沈紅梅博士與達科為公司的技術(shù)支持介紹了全光譜流式的原理、多色應用、多重細胞因子檢測的方法等內(nèi)容。
   

樣本制備和上機操作部分
參加培訓的學員共分為四組，完成了16色樣本，磁珠分選及多重（8種）細胞因子檢測等樣本的制備，并在3激光Cytek Northern Lights^TM全光譜流式細胞儀上進行了收集。很多學員反饋用Cytek全光譜流式細胞儀檢測多重細胞因子，操作非常簡便。而且多色樣本中CD4+CD25+CD127^low的調(diào)節(jié)T細胞分群非常清晰，體現(xiàn)了光譜流式對于弱表達標志物的卓越分辨率。

 

在數(shù)據(jù)分析的部分
學員們通過使用De Novo^TM FCS Express 6軟件對多色實驗的光譜流式數(shù)據(jù)進行了分析，并完成了t-SNE分析圖的繪制。此外，還通過使用Biolegend公司的LEGENDplex^TM軟件對多重細胞因子檢測的光譜流式數(shù)據(jù)進行了分析處理，得到的標準曲線R²都高于0.999，表明具有較高的擬合度。

 

下圖為利用Cytek全光譜流式細胞儀檢測得到的多重細胞因子結(jié)果圖，使用B4/PE作為報告通道，R1/APC用于因子分類通道。Beads A門中包含5個細胞因子的群體；Beads B門中包含3個細胞因子的群體。如果想了解 檢測多重細胞因子具體步驟，請點擊下方“閱讀原文”。任何一臺具有藍色和紅色激光的Aurora或Northern Lights 全光譜流式細胞儀都能用于這個應用的檢測。

經(jīng)Cytek全光譜流式細胞儀檢測的多重細胞因子的流式數(shù)據(jù)（FCS files）可以導入LEGENDplex^TM分析軟件進行分析，下圖為8個標準品的光譜流式數(shù)據(jù)經(jīng)過軟件分析擬合的標準曲線，其中除了IL-10標準曲線的R²為0.999外，其余因子均為1，R²越接近于1代表標準曲線擬合度越好，樣本檢測值會越準確。這個結(jié)果也反映了光譜流式在多重細胞因子實驗中較高的準確度和靈敏度。圖中橫坐標表示濃度單位，以對數(shù)形式顯示。如果想了解具體的LEGENDplex^TM軟件分析多重細胞因子檢測結(jié)果的方法。 作為助力本次實驗完成的可靠“幫手”，3激光配置Cytek Northern LightsTM全光譜流式細胞儀，已經(jīng)取得臨床注冊證！