可視化Transwell細胞趨化實驗流程詳解

瀏覽次數(shù)：1505　發(fā)布日期：2024-4-23　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

定義：趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學趨向性）是趨向性的一種，指身體細胞、細菌及其他單細胞、多細胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學物質(zhì)而趨向的運動。這對細菌尋找食物 (如葡萄糖) 十分重要，細菌以此趨進有較高食物分子濃度的地方，或遠離有毒 (如苯酚) 的地方。在多細胞生物中，趨化性對其發(fā)展和其他正常功能一樣不可或缺。正趨化性指趨向較高化學物質(zhì)濃度的運動，而負趨化性則相反。

使用ibidiμ-Slide Chemotaxis細胞趨化載玻片的化學趨化實驗，可以實時觀察記錄細胞的趨化行為。

ibidi細胞趨化板（80326）

實驗流程：

在實驗開始之前

必要設(shè)備

基本要求：

倒置相差顯微鏡（推薦 5 倍或 10 倍物鏡）
用于延時圖像采集的相機
Stage Top 培養(yǎng)箱（大多數(shù)哺乳動物細胞類型需要）

推薦擴展：

用于并行圖像采集的電動載物臺
自動對焦

1.樣品制備：

使用µ-Slide Chemotaxis，可以進行具有定義的趨化梯度的可重現(xiàn)的趨化性測定。

首先，細胞播種，這可以在 2D 或 3D 環(huán)境中完成。孵育和細胞附著后，根據(jù)確定的加載方案，每個腔室的兩個儲層都充滿了趨化劑。

µ-Slide Chemotaxis包含 3 個獨立的腔室，用于使用緩慢或快速遷移的細胞進行平行趨化性測定。

它允許在可重現(xiàn)的環(huán)境中創(chuàng)建精確定義的穩(wěn)定趨化梯度。

2.活細胞成像

生理條件下的活細胞成像能夠詳細記錄細胞隨時間的遷移，這是正確分析趨化性測定所必需的過程。

成像周期的持續(xù)時間取決于細胞類型（例如，快速遷移的白細胞或緩慢遷移的腫瘤細胞或成纖維細胞）和環(huán)境條件（例如，趨化劑的類型和濃度）。用于緩慢遷移細胞的典型視頻顯微鏡設(shè)置包括在 24 小時內(nèi)每 2.5-10 分鐘拍攝一張照片。

由于每個實驗最佳地包含來自 20-40 個單細胞的跟蹤數(shù)據(jù)，因此應(yīng)使用低倍顯微鏡物鏡，例如 4 倍或 10 倍。

ibidi Stage Top 培養(yǎng)箱提供顯微鏡下的生理環(huán)境，可在短期和長期趨化性測定期間實現(xiàn)活細胞成像。

MDA-MB-231 人乳腺癌細胞在膠原凝膠中遷移的延時顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀察細胞 24 小時。生理條件由 ibidi 加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)維持。

3.細胞追蹤

通常，趨化性測定的活細胞顯微鏡檢查會創(chuàng)建時間圖像堆棧，其中每個圖像顯示特定時間點的確切細胞位置。

為了量化它們的運動，通過確定它們在圖像堆棧的每一幀上的位置來跟蹤單個細胞。跟蹤可以手動完成，也可以使用特殊軟件自動完成。之后，每個跟蹤單元格 (x, y) 的位置值可用于每個時間點 (t) 并可以進一步分析

自動跟蹤和數(shù)據(jù)分析：

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI 圖像分析是一種基于 AI 的自動圖像分析解決方案，用于趨化性測定�；诰W(wǎng)絡(luò)的軟件將快速而強大的細胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結(jié)合，無需標記即可進行客觀且可重復(fù)的分析。只需將您的數(shù)據(jù)上傳到您的 FastTrack AI 帳戶并開始分析工作。在 1 到 2 小時內(nèi)，您將收到一份詳細的報告以供下載和進一步評估。