MC-38/OVA 細胞說明書
產品信息
細胞名稱 小鼠結腸癌細胞株轉染 OVA;MC-38/OVA
細胞別稱 MC-38/OVA
產品規(guī)格 1 × 106cells/T25 培養(yǎng)瓶
生長特性 半貼壁半懸浮
細胞形態(tài) 混合生長
培養(yǎng)體系 RPMI 1640+10% FBS+1% P/S
傳代比例 1:2
消化時間 1-2min
凍存條件 無血清細胞凍存液(科研級)
培養(yǎng)環(huán)境 氣相:空氣,95% ;二氧化碳,5% 。溫度:37℃。
注意事項
收集細胞瓶中完全培養(yǎng)基做過渡對比培養(yǎng);每傳 10 代左右,用嘌呤霉素 (4ug/ml)鞏固一下。
常溫細胞收貨后處理方法
1. 收到細胞后,首先觀察培養(yǎng)瓶是否完好,若發(fā)現培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)基外溢、渾濁等現象, 請及時拍照并與我們聯系。
2. 用 75%酒精對培養(yǎng)瓶表面進行消毒處理,將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4 h , 以 恢復細胞狀態(tài)。
3. 靜置完成后,取出培養(yǎng)瓶,顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存 (40× , 100× ,200×各一張)前三天照片為重要售后依據。如發(fā)現細胞異常請及時與我們聯系, 如果細胞簽收三天內未與我們聯系,則默認為收貨良好。
4. 若細胞密度超過 80% ,則可以根據提供的細胞培養(yǎng)步驟進行傳代或凍存;若細胞密度未達 到 80% ,收集懸浮細胞,加入 5mL 完全培養(yǎng)基到原瓶中,放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
凍存細胞收貨后處理方法
1. 收到細胞后,首先觀察泡沫箱中干冰是否有剩余,凍存管是否完好,是否有解凍情況,若 發(fā)現干冰完全汽化或凍存管有解凍現象,請及時拍照并與我們聯系。如果細胞簽收三天內 未與我們聯系,則默認為收貨良好。
2. 復蘇第一管如有活性、狀態(tài)問題及時與我們聯系,會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第 二管。
特別說明:未與我方聯系,擅自復蘇第二管出現問題不予售后
細胞培養(yǎng)步驟
1. 復蘇細胞:從液氮灌或-80℃冰箱中查找到需要復蘇的細胞,水浴鍋提前打開預熱37℃。
1) 將查找到的凍存細胞在 37℃水浴中迅速搖晃解凍;
2) 將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的離心管中,1000rpm 離心 5min;
3) 棄去上清液,補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻,接種于 T25 培養(yǎng)瓶中(或 6cm 皿中), 培養(yǎng)過夜,第二天換液并檢查細胞密度。
2. 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90% ,即可進行傳代培養(yǎng)。
1) 懸浮細胞用離心管收集細胞懸液,1000rpm 離心 5min ,棄去上清液;
2) 貼壁細胞用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次;
3) 加 1-2mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消 化 1-2min ,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回 操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加 5mL 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化;
4) 輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在 1000RPM 條件下離心 5-8min ,棄去上清液;
5) 將懸浮細胞和貼壁細胞收集到的細胞沉淀,加 1-2mL 完全培養(yǎng)基吹打混勻;
6) 按 5-6mL/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按 1:2 的比例分到新的含 5-6 mL 培養(yǎng)液的培養(yǎng) 皿中或者培養(yǎng)瓶中。
(即 1 個 T25 傳代接種至 2 個 T25 或者 2 個直徑為 6cm 的培養(yǎng)皿)
3. 細胞凍存:細胞收集參照傳代步驟 1~2 ;按凍存數量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱 過夜,后續(xù)可轉入液氮罐中長期保存。