ELISA試劑盒結(jié)果分析方式方法詳述
在ELISA試劑盒試驗中的各項操作細節(jié)有許多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，加樣時由低濃度向高濃度加，因為這樣能夠削減跳孔的幾率。而整個試驗的最后關(guān)鍵就是成果的處理辦法了，是ELISA試劑盒結(jié)果分析方法。
1、ELISA試驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
2、均勻OD值減去空白孔的OD值。
3、規(guī)范曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運用適宜的軟件來作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條最適宜的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實際濃度很接近(+/-10%)。挑選擬合度最高的那條曲線。
假如出現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值差別很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能趕快進行下一步操作、增加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育方位避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標板孔問參加的試劑量不同，相對應(yīng)的解決辦法是加樣時請當心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請當心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、增加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，汲取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、承認孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、運用已校正過的微量加樣器，如將*次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性。
定性和定量是ELISA測定按其表示測定結(jié)果的方式分為的兩大類。定性測定是對標本中是否存在待測抗原或抗體作出結(jié)論，分別用“陽性"和“陰性"來表示。由此可見傳染性病原體的抗原或抗體通常是用的定性測定，以此判斷特定病原體感染的存在與否。
定量測定基本上是用于非病原體抗原物質(zhì)的測定，是對標本中待測抗原的數(shù)量進行量值測定，以具體數(shù)值來表示。定量測定，如激素、細胞因子、腫瘤標志物、小分子藥物等FP，hCG、細胞因子等的定量測定。
ELISA定性測定的“陰性"和“陽性"的判定依據(jù)是試劑盒所確定的陽性判定值(cut-off)。elisa試劑盒中所帶標準品同時測定得出的劑量反應(yīng)曲線(又稱標準曲線)是定量測定的量值依據(jù)。
ELISA定性測定結(jié)果判定中常用的一些縮寫也可以幫助您看明白ELISA實驗結(jié)果：
(1)S／CO：其中S為sample(樣本)或specimen(標本)的簡寫，表示的是標本測定的吸光度值，CO為cut-off值的簡寫。除競爭抑制法外，其他ELISA定性測定模式中，當S／CO值大于或等于1時，標本的測定為陽性，小于1時為陰性。
(2)S／N或P／N：其中S同(1)，N為negative(陰性對照)的簡寫，P為patient(患者)的簡寫。較早的試劑盒很多都使用S／N或P／N≥2．1為陽性判定標準。
1、ELISA試驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
2、均勻OD值減去空白孔的OD值。
3、規(guī)范曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運用適宜的軟件來作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條最適宜的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實際濃度很接近(+/-10%)。挑選擬合度最高的那條曲線。
假如出現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值差別很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能趕快進行下一步操作、增加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育方位避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標板孔問參加的試劑量不同，相對應(yīng)的解決辦法是加樣時請當心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請當心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、增加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，汲取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、承認孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、運用已校正過的微量加樣器，如將*次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性。
定性和定量是ELISA測定按其表示測定結(jié)果的方式分為的兩大類。定性測定是對標本中是否存在待測抗原或抗體作出結(jié)論，分別用“陽性"和“陰性"來表示。由此可見傳染性病原體的抗原或抗體通常是用的定性測定，以此判斷特定病原體感染的存在與否。
定量測定基本上是用于非病原體抗原物質(zhì)的測定，是對標本中待測抗原的數(shù)量進行量值測定，以具體數(shù)值來表示。定量測定，如激素、細胞因子、腫瘤標志物、小分子藥物等FP，hCG、細胞因子等的定量測定。
ELISA定性測定的“陰性"和“陽性"的判定依據(jù)是試劑盒所確定的陽性判定值(cut-off)。elisa試劑盒中所帶標準品同時測定得出的劑量反應(yīng)曲線(又稱標準曲線)是定量測定的量值依據(jù)。
ELISA定性測定結(jié)果判定中常用的一些縮寫也可以幫助您看明白ELISA實驗結(jié)果：
(1)S／CO：其中S為sample(樣本)或specimen(標本)的簡寫，表示的是標本測定的吸光度值，CO為cut-off值的簡寫。除競爭抑制法外，其他ELISA定性測定模式中，當S／CO值大于或等于1時，標本的測定為陽性，小于1時為陰性。
(2)S／N或P／N：其中S同(1)，N為negative(陰性對照)的簡寫，P為patient(患者)的簡寫。較早的試劑盒很多都使用S／N或P／N≥2．1為陽性判定標準。
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