實(shí)驗(yàn)秘笈--最亮的細(xì)胞轉(zhuǎn)染怎么做？
做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時小編就抱著一個信念，就是要給細(xì)胞點(diǎn)“顏色”看（熒光），但你知道嗎？就這個簡單的實(shí)驗(yàn)過程，小小的細(xì)胞卻有著大大的能量，實(shí)驗(yàn)過程中帶陽離子的脂質(zhì)體充當(dāng)著“搬運(yùn)工”的角色將質(zhì)粒從胞外“抓”到胞內(nèi)，而細(xì)胞為質(zhì)粒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯提供“場所和原材料”，自己也跟著“增光填色”,但“上色”過程中會遇到一些問題，總結(jié)下來主要有以下二個方面：
➙ 細(xì)胞狀態(tài)差
➙ 轉(zhuǎn)染效率低
本著“不會解決實(shí)驗(yàn)問題的技術(shù)員不是一個好技術(shù)員”的原則，下面小編就分享一下自己的經(jīng)驗(yàn)。
A：分析：主要是鋪板和反應(yīng)液配制的原因
⇒ 細(xì)胞狀態(tài)是整個實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，則轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)當(dāng)然就好不了
⇒ 鋪板：過多或不均勻，細(xì)胞長的太滿就會狀態(tài)較差
⇒ 脂質(zhì)體本身有毒性，如果脂質(zhì)體加入量太多，會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)較差，或者細(xì)胞死亡，建議在做正式實(shí)驗(yàn)前，先做一下預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索一下質(zhì)粒和脂質(zhì)體的配比。
A：分析：主要是細(xì)胞原因和“搬運(yùn)”過程中的問題
❶. 細(xì)胞狀態(tài)仍然是重中之重，如果有一段時間轉(zhuǎn)染效果很不理想，必須要換一批次細(xì)胞；
❷. 加入目的質(zhì)粒后輕輕混勻，太用力會破壞混合液的結(jié)構(gòu)，
❸. 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的比值： 過高一部分質(zhì)粒不能進(jìn)入細(xì)胞，過低“搬運(yùn)工”太多，有毒性且浪費(fèi)；
❹. 吸、打液體時注意槍頭內(nèi)液面高度，是否完全打出；
❺. 反應(yīng)液配好后等待20min，質(zhì)粒才會被完全包裹；
❻. 反應(yīng)液滴加加入細(xì)胞，使“脂質(zhì)體+質(zhì)�！本鶆蚍植�；
❼. 質(zhì)粒反復(fù)凍融影響濃度，盡量減少凍融次數(shù)；脂質(zhì)體 -20℃保存，用完應(yīng)馬上放回；
❽. 必要時需要檢測一下質(zhì)粒的濃度是否準(zhǔn)確；
轉(zhuǎn)染需48h，可以提前知道轉(zhuǎn)染的效果嗎？
根據(jù)經(jīng)驗(yàn)轉(zhuǎn)染24h時的熒光效果至少達(dá)到下圖水平那么基本上不用擔(dān)心了~
你學(xué)會給細(xì)胞“上色”了嗎？歡迎提出更多的實(shí)驗(yàn)問題，大家一起討論！
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