對于一個完美的westernblot實驗，蛋白在聚丙烯凝膠中根據(jù)天然分子量進行分離，蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上，然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。

對于轉印來說，使用濕轉的方法是比較好的，因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中，在半干轉的條件下，轉印是在兩個電極板之間發(fā)生，這種類型的轉印裝置可能影響蛋白的轉印效率和膜上的截留能力。對于優(yōu)化蛋白的轉印條件，每個系統(tǒng)的優(yōu)缺點都應該考慮進去。

濕轉

對于一個濕轉過程，要建立一個三明治結構，順序為海綿，濾紙，膜，膠，濾紙，和第二個海綿。在組裝之前，需要將所有部分（包括膠）放在轉印buffer中進行平衡，然后將堆疊的三明治結構用轉印夾夾起來放在轉印裝置上，連上電極裝置，蛋白在轉印buffer中從膠上轉移到膜上。大多數(shù)western blot實驗應用都可以使用濕轉。

半干轉

對于半干轉來說，也需要進行堆疊組裝（濾紙，膠，膜需要放在轉印buffer中進行預平衡）放在裝置電極板的底部，蓋上上極板，高強的電流通過三明治結構，轉印速度較快，一般小于1h。

轉印的注意事項

1.當準備轉印buffer時一定要注意：小組分的不一致都可能影響轉印

2.使用高質量，純度高的甲醇溶液，如果甲醇質量不佳，會影響轉膜的效率

3.不要稀釋轉印buffer

4.不要調整轉印buffer的PH值

5.為了得到最佳的轉印，buffer要使用新的

6.裝置保持干凈

7.使用一定厚度的膠（0.5-0.75）

8.如果使用PVDF膜，膜在轉印之前需要在100%甲醇中進行浸泡

9.轉印墊，濾紙，膠和膜需要在轉印buffer中平衡至少15min

10.在轉印的時候要將膜和膠之間的空泡趕走

11.確定電極是連接正確，避免不必要的損失

12.使用預染的分子量marker，來監(jiān)控轉印

13.對于難轉印的蛋白，可以調整甲醇和SDS的濃度，SDS能夠提升蛋白從膠上的遷移而抑制與膜的結合。甲醇能夠促進蛋白和膜的結合，但是阻礙蛋白從膠上的遷移。