在這個草長鶯飛的春天，是否記得那句“要想富，多栽樹”的宣傳標語？今天的植樹節(jié)，百奧賽圖知識拓展課堂攜智慧樹如期而至，與您攜手探尋TNFR2。
 

基本信息
 

基因功能簡介
 

TNFRSF1B（TNF receptor superfamily member 1b） 為TNF受體超家族成員, 也稱為TNFR2，主要表達在腫瘤微環(huán)境中的Treg細胞和多種腫瘤細胞中（如卵巢癌和腸癌）。其配體TNF主要識別TNFR1進行凋亡，依賴TNFR2進行與T細胞存活相關的功能——通過NF-κB信號促進pro-survival基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進細胞增殖和生存。許多實驗表明阻斷型抗體可以特異性殺傷腫瘤微環(huán)境中的Treg細胞和腫瘤細胞，用于治療多種腫瘤；而激活型抗體可以激活Treg細胞，進而抑制Teff細胞，從而治療自身免疫疾病，為免疫治療提供了新的靶點。
 

信號通路
 

TNFR1和TNFR2介導了不同的信號和作用^[1]

 表型分析
 

B-hTNFR2小鼠mRNA表達分析
 

 

通過RT-PCR對WT和B-hTNFR2小鼠中TNFR2基因表達進行品系特異性分析。在C57BL/6小鼠中可檢測到mTNFR2 mRNA，而hTNFR2 mRNA僅在B-hTNFR2純合鼠中檢測到。

 

采用RT-qPCR對WT和B-hTNFR2小鼠的TNFR2基因表達進行品系特異性分析。
 

B-hTNFR2純合鼠中hTNFR2的mRNA表達與野生鼠C57BL/6相似，說明用B-hTNFR2小鼠人源化小鼠模型并沒有改變TNFR2蛋白的表達水平。

 

B-hTNFR2小鼠蛋白表達分析



 

通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達進行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠B細胞表面檢測到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠B細胞表面檢測到hTNFR2。
 

 

通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達進行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠T細胞表面檢測到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠T細胞表面檢測到hTNFR2。

 

 

通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達進行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠Treg細胞表面檢測到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠Treg細胞表面檢測到hTNFR2。

 

B-hTNFR2小鼠的白細胞亞群分析
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。

結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響T，B，NK，粒細胞，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出淋巴結細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響T，B，NK細胞的分化。
 

 

從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出淋巴結細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。

 

TNFR2抗體與B-hTNFR2純合鼠T細胞結合分析
 

 

從B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試TNFR2抗體與脾細胞的結合。
 

從anti-mCD3ε(0.2或1μg/mL)和anti-mCD28(1μg/mL)體內(nèi)刺激的B-hTNFR2小鼠分離出脾細胞。單個活細胞用CD45圈門后用于進一步的分析。如圖所示，與同型對照抗體(hIgG)相比，hTNFR2 Ab2與B-hTNFR2純合鼠的T細胞是結合的。在anti-mCD3ε(0.2μg /mL)刺激條件下，mTNFα增強了hTNFR2 Ab2與B-hTNFR2純合鼠的T細胞結合，這表明mTNFα/hTNFR2信號通路在B-hTNFR2純合鼠中是可行的。

 

TNFR2抗體藥效驗證
 

 

將鼠結腸癌MC38細胞皮下植入純合的B-hTNFR2小鼠中，當腫瘤體積達到約100 mm³時，對小鼠進行分組，然后使用抗人類TNFR2抗體進行治療。與對照組相比，兩種人TNFR2抗體以不同程度抑制腫瘤生長，證實B-hTNFR2小鼠模型是體內(nèi)TNFR2抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。
 

參考資料

[1]Faustman D, Davis M. TNF receptor 2 pathway: drug target for autoimmune diseases. Nat Rev Drug Discov 2010, 9(6): 482-493.

[2]Torrey H, Butterworth J, Mera T, Okubo Y, Wang L, Baum D, et al. Targeting TNFR2 with antagonistic antibodies inhibits proliferation of ovarian cancer cells and tumor-associated Tregs. Sci Signal 2017, 10(462).

今天的知識拓展課堂到此結束，更多精彩內(nèi)容，敬請期待~