Gateway克隆技術-BP反應構建入門載體與LR反應構建表達載體的區(qū)別
提到克隆、重組載體，就想到5字金言：分、切、連、轉、篩，“分”是指分離制備合格的待操作的DNA；“切”是指用序列特異的限制性內切酶切開載體DNA，或者切出目的基因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DNA連接起來，形成重組的DNA分子；“轉”是指通過轉染的方法將重組的DNA分子導入宿主細胞中進行復制和擴增；“篩”則是從宿主群體中挑選出攜帶有重組DNA分子的克隆。實驗具體怎么做，細節(jié)大體是沒印象了，但是這5個字卻記得真真切切，都是血淚的教訓，現在說起來貌似很簡單，誰知道當初這5步歷經了多少次煉獄循環(huán)。
沒錯，在過去數十年，用限制性內切酶產生黏性末端，在DNA連接酶的作用下，連接兩個甚至更多片段的克隆方法，是載體構建的經典方案。但是現如今我們再提到克隆的時候，遠遠不再只有傳統(tǒng)的限制酶克隆一種選擇。其中Gateway克隆技術作為一種可以快速、高效將DNA序列轉移到載體上的克隆方法已經流行開來。不要覺得Gateway克隆技術高深莫測，其實了解一下你就能懂。
Gateway克隆方法是λ噬菌體感染細菌時發(fā)生的整合和切割重組反應的體外形式。在體內，噬菌體（attP）和細菌（attB）的附著位點發(fā)生重組反應，噬菌體整合到細菌基因組中，兩側為兩個新的重組位點（attL-left-和attR-right-）。在某些條件下，attL和attR位點可以重組，導致噬菌體從細菌染色體上切除并重新生成attP和attB位點。
即Gateway技術依賴于下面描述的兩個反應：BP反應和LR反應，通過BP反應獲得入門克隆(有時候我們也說中間克隆)，再通過LR反應將目的DNA以正確的方向連接到各種目的載體上，形成不同的表達載體。GeneCopoeia提供的 EZShuttle™重組克隆體系應用E.coli和λ噬菌體特異位點的重組酶促體系使 DNA片段在載體間相互轉換，其原理與 Gateway克隆技術相同。
BP反應-構建入門載體：
通過PCR將attB位點添加到目的DAN序列兩側，形成attB-PCR產物。用attB-PCR產物或者含attB位點的供體質粒和含attP位點的質粒發(fā)生重組生成入門克隆。
| 貨號 | 名稱 | 說明 |
| RCBM-1002-020 | EZRecombinase™ BP Cloning Kit (20 rxn) | Catalyzes attB x attP cloning（催化BP反應） |
| RCBM-1002-100 | EZRecombinase™ BP Cloning Kit (100 rxn) | Catalyzes attB x attP cloning（催化BP反應） |
LR反應-構建表達載體：
制作表達載體時，選擇適合的目標載體非常重要。這種選擇取決于許多因素，如宿主類型，所需的表達水平和實驗目的。選定的attR表達載體與attL-入門載體重組以產生表達載體。
| 貨號 | 名稱 | 說明 |
| RCBM-1001-020 | EZRecombinase™ LR Cloning Kit (20 rxn) | Catalyzes attL x attR cloning（催化LR反應） |
| RCBM-1001-100 | EZRecombinase™ LR Cloning Kit (100 rxn) | Catalyzes attL x attR cloning（催化LR反應） |
除了可以提供載體構建的BP Mix和LR Mix，GeneCopoeia還可提供40,000多種人和小鼠不同載體的即用型ORF表達克�。ǹ芍苯佑糜隗w內或體外不同宿主或表達系統(tǒng)的蛋白表達，省卻克隆構建步驟），以及20,000種人和15,000小鼠Gateway PLUS入門克隆（還需要進行亞克隆，將ORF序列轉移到表達克隆中）。你的基因我承包，不管你是需要構建好的表達克隆，還是入門克隆，不要猶豫，請聯(lián)系艾美捷科技，全方位科研需求的表達系統(tǒng)以及眾多的融合標簽可以滿足您的花樣需求
全方位科研需求的表達系統(tǒng)
| 大腸桿菌表達克隆 | 15種 |
| 哺乳動物細胞表達克隆 | 48種 |
| 慢病毒表達克隆 | 82種 |
| 昆蟲細胞表達克隆 | 1種 |
| 酵母表達克隆 | 3種 |
| 麥胚無細胞表達克隆 | 8種 |
眾多的融合標簽
| 熒光蛋白標簽 | eGFP、eYFP、eCFP、mCherry |
| 多功能標簽 | HaloTag®、AviTag™、SNAP- Tag™ |
| 促溶解度標簽 | His、Trx、SUMO、GST、MBP |
| 抗體免疫共沉淀標簽 | HA、Flag、cMyc |
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