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M2點(diǎn)樣儀助力沙門氏菌血清分型檢測

瀏覽次數(shù):388 發(fā)布日期:2025-2-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
沙門氏菌是一種能引起食源性疾病的細(xì)菌,廣泛存在于各種食物、水、土壤以及動(dòng)物糞便中。世界范圍內(nèi)每年患病人數(shù)約9500萬例,癥狀表現(xiàn)為腹瀉、發(fā)燒、腹部痙攣和嘔吐等,嚴(yán)重可導(dǎo)致脫水性敗血癥甚至死亡。其血清亞型超過2500種,分型通常與宿主或地理位置有關(guān),傳統(tǒng)的凝集法不僅需要有豐富的技術(shù)經(jīng)驗(yàn),消耗大量的試劑和樣品,檢測周期也較長。相比之下,蛋白微陣列法(蛋白芯片檢測技術(shù))快速、特異性強(qiáng)、操作簡單,同時(shí)不受限于數(shù)據(jù)庫。另外,利用不同的特異性抗體檢測多種抗原血清,可在一次實(shí)驗(yàn)中分析多種病原體。


 
2024年4月,來自德國萊布尼茨光子技術(shù)研究所和耶拿大學(xué)感染診斷學(xué)研究中心的Ralf Ehricht教授團(tuán)隊(duì),在Pathogens雜志上發(fā)表了一篇題目為“A Proof-of-Concept Protein Microarray-Based Approach for Serotyping of Salmonella enterica Strains”的文章;诘鞍孜㈥嚵校ǖ鞍仔酒瑱z測技術(shù))對腸道沙門氏菌進(jìn)行血清分型。

該團(tuán)隊(duì)收集10種沙門氏菌免疫血清,并用緩沖液分別稀釋6、8、10和20倍,大腸桿菌和 PBS 緩沖液為陰性對照,德國M2-Automation生物芯片點(diǎn)樣儀以17 × 17微陣列點(diǎn)樣到96孔板(孔內(nèi)底部功能化處理),每種樣品重復(fù)點(diǎn)印至少四次(單孔內(nèi)4個(gè)重復(fù)),點(diǎn)間距0.22 mm,靜置偶聯(lián)10分鐘后,制備成微孔板蛋白芯片(如圖1)。

圖1:腸道沙門氏菌亞群蛋白微陣列芯片
(左圖:10種沙門氏菌免疫血清1:6/1:8/1:10/1:20稀釋后的點(diǎn)樣陣列排布,4個(gè)重復(fù)陣列;右圖:單孔內(nèi)陣列示意圖)

隨后將32種不同的腸道鏈球菌亞型和1種邦戈沙門氏菌的菌株細(xì)胞,大腸桿菌細(xì)胞、PBS緩沖液分別加到微孔板蛋白芯片上,用HRP標(biāo)記的抗沙門氏菌多克隆抗體雜交,繼而加入TMB(四甲基聯(lián)苯胺)底物顯色進(jìn)行斑點(diǎn)檢測和數(shù)據(jù)分析(如圖2)。

圖2:基因分型檢測示意圖:沙門氏菌O或H抗原與特異性免疫血清結(jié)合,被酶標(biāo)捕獲抗體捕獲,最后使用TMB(四甲基聯(lián)苯胺)底物催化顯色,進(jìn)行信號(hào)檢測。

結(jié)果:基于微陣列的斑點(diǎn)檢測和數(shù)據(jù)分析,結(jié)合所有點(diǎn)樣血清類型,顯示出血清分型的高度準(zhǔn)確性和特異性(如圖3)

圖3: 基因分型的結(jié)果分析(準(zhǔn)確度、靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值)

微陣列檢測具有足夠的靈敏性和特異性,可有效用于血清分型或菌株篩選,是一種極具前景的快速檢測手段和方法。

原文鏈接:https://doi.org/10.3390/ pathogens13050355

M2-Automation成立于2003年,總部位于德國柏林,是一家創(chuàng)新技術(shù)開發(fā)公司,專注于微量/超微量、非接觸式自動(dòng)化移液和生物芯片點(diǎn)樣技術(shù)。儀器準(zhǔn)確性、精確性高,重復(fù)性好,全程自動(dòng)化點(diǎn)樣,同時(shí)可根據(jù)客戶需求進(jìn)行定制。


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