HL-1心肌細胞培養(yǎng)和復(fù)蘇的主意事項及其應(yīng)用前景
細胞簡介
HL-1心肌細胞系是一只成年雌性近交系C57BLy 6J小鼠中切除的皮下腫瘤中建立，該小鼠為轉(zhuǎn)染了由心房利鈉因子啟動子和SV40區(qū)域組成的融合基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。能夠持續(xù)分裂和自發(fā)收縮，同時保持已分化的心臟表型。HL-1細胞可以連續(xù)傳代且不會失去其分化的特異性心肌細胞表型，常用于研究正常心肌細胞在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞代謝和轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的功能，以及體外模擬諸如缺氧、高血糖-高胰島素血癥、細胞凋亡和缺血-再灌注等病理條件。
解鎖心臟研究的鑰匙
HL-1細胞系成為了科學(xué)家們研究心臟生理、病理及藥物篩選的重要工具。然而，HL-1細胞的培養(yǎng)并非易事，今天，我們將為您揭開HL-1細胞培養(yǎng)的神秘面紗，并分享一些關(guān)鍵的注意事項，助您在心臟研究的道路上走得更穩(wěn)、更遠。
一、HL-1細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)細節(jié)介紹
1. 培養(yǎng)基準(zhǔn)備
HL-1細胞的生長依賴于特制的培養(yǎng)基，通常由以下成分組成：
· Claycomb培養(yǎng)基：這是HL-1細胞的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，需添加10%胎牛血清（FBS）。 (Sigma貨號：51800C)
· 添加劑：包括去甲腎上腺素（0.1 mM）貨號： CSP209、L-谷氨酰胺（2 mM）貨號：CSP012。
· 推薦購買中喬新舟完全培養(yǎng)基： 貨號 ZM0920。
2. 細胞的培養(yǎng)注意事項
· 該細胞貼壁性差，培養(yǎng)過程中會有一些圓形細胞。推薦使用Corning的高吸附cellbinding細胞培養(yǎng)瓶（貨號：3289）進行細胞培養(yǎng)�；蛘呤褂妹髂z基質(zhì)CSP132預(yù)包被培養(yǎng)瓶，37度孵育至少1小時后去除基質(zhì)再進行細胞培養(yǎng)，或包被好放入4度備用。
· HL-1細胞培養(yǎng)生長至80% 即可傳代。細胞消化時間略長，約8-15分鐘細胞成纖維樣細胞收縮分離脫落即可用完全培養(yǎng)液終止消化即可。
· 細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基2-3天不進行換液，培養(yǎng)基會變深，變黑的現(xiàn)象，是正�，F(xiàn)象。
· 為確保培養(yǎng)基的新鮮，建議完全培養(yǎng)基避光保存，減少添加劑的降解。
· 嚴格無菌操作，避免細菌、真菌或支原體污染。定期檢測細胞是否被支原體污染，必要時使用支原體清除試劑處理。
3. 細胞信息
· 細胞特征：HL-1細胞應(yīng)呈現(xiàn)典型的梭形或多邊形部分貼壁不牢固的圓形，排列緊密。
· 倍增時間：~35-50 小時，生長緩慢，(80%匯合度T25瓶傳2個T25培養(yǎng)瓶長滿約4-6天)
· 換液頻率：2~3次/周
4.細胞復(fù)蘇
· 從液氮中取出凍存的HL-1細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉(zhuǎn)移到實驗室)
· 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至含預(yù)溫培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。（T25添加7ml）
· 將細胞接種于預(yù)先涂覆明膠的培養(yǎng)皿中，置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
· 由于該細胞復(fù)蘇后貼比率差，且形態(tài)不好看，我司決定HL-1細胞以凍存管的方式出售。
· 以下圖片是我司客戶收到凍存管復(fù)蘇后第二天細胞圖。復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶后4-5天可進行傳代處理。期間可換液一次。(T25瓶7ml培養(yǎng)基)。
5. 細胞傳代
· 當(dāng)細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代。
· 棄去舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕洗滌細胞。
· 加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化8-15分鐘。消化成流沙狀成單個細胞脫落。
· 加入完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細胞至單細胞懸液。
· 按1:2或1:3的比例將細胞接種至新的明膠包被培養(yǎng)皿中。
6. 細胞凍存
· 選擇對數(shù)生長期的細胞，消化并收集細胞懸液。
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
· 用凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸細胞，分裝至凍存管中。
· 采用程序降溫法或無血清凍存液，最后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
二、HL-1細胞的應(yīng)用前景
HL-1細胞因其獨特的心肌細胞特性，在心血管研究中具有廣泛的應(yīng)用價值：
· 疾病模型構(gòu)建：通過基因編輯或藥物處理，模擬心肌肥厚、心律失常等疾病狀態(tài)。
· 藥物篩選：用于評估藥物對心肌細胞的影響，加速新藥研發(fā)進程。
· 分子機制研究：揭示心臟發(fā)育、代謝及信號通路的分子機制。
HL-1細胞的培養(yǎng)雖然具有一定的挑戰(zhàn)性，但只要掌握正確的操作方法和注意事項，便能充分發(fā)揮其在心臟研究中的潛力。無論是探索心臟疾病的奧秘，還是開發(fā)新型治療藥物，HL-1細胞都將成為您科研路上的得力助手。讓我們一起用心呵護這些“跳動”的細胞，為心血管健康貢獻一份力量！
HL-1心肌細胞系是一只成年雌性近交系C57BLy 6J小鼠中切除的皮下腫瘤中建立，該小鼠為轉(zhuǎn)染了由心房利鈉因子啟動子和SV40區(qū)域組成的融合基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。能夠持續(xù)分裂和自發(fā)收縮，同時保持已分化的心臟表型。HL-1細胞可以連續(xù)傳代且不會失去其分化的特異性心肌細胞表型，常用于研究正常心肌細胞在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞代謝和轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的功能，以及體外模擬諸如缺氧、高血糖-高胰島素血癥、細胞凋亡和缺血-再灌注等病理條件。
（中喬新舟HL-1細胞培養(yǎng)圖 10X）
解鎖心臟研究的鑰匙
HL-1細胞系成為了科學(xué)家們研究心臟生理、病理及藥物篩選的重要工具。然而，HL-1細胞的培養(yǎng)并非易事，今天，我們將為您揭開HL-1細胞培養(yǎng)的神秘面紗，并分享一些關(guān)鍵的注意事項，助您在心臟研究的道路上走得更穩(wěn)、更遠。
一、HL-1細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)細節(jié)介紹
1. 培養(yǎng)基準(zhǔn)備
HL-1細胞的生長依賴于特制的培養(yǎng)基，通常由以下成分組成：
· Claycomb培養(yǎng)基：這是HL-1細胞的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，需添加10%胎牛血清（FBS）。 (Sigma貨號：51800C)
· 添加劑：包括去甲腎上腺素（0.1 mM）貨號： CSP209、L-谷氨酰胺（2 mM）貨號：CSP012。
· 推薦購買中喬新舟完全培養(yǎng)基： 貨號 ZM0920。
2. 細胞的培養(yǎng)注意事項
· 該細胞貼壁性差，培養(yǎng)過程中會有一些圓形細胞。推薦使用Corning的高吸附cellbinding細胞培養(yǎng)瓶（貨號：3289）進行細胞培養(yǎng)�；蛘呤褂妹髂z基質(zhì)CSP132預(yù)包被培養(yǎng)瓶，37度孵育至少1小時后去除基質(zhì)再進行細胞培養(yǎng)，或包被好放入4度備用。
· HL-1細胞培養(yǎng)生長至80% 即可傳代。細胞消化時間略長，約8-15分鐘細胞成纖維樣細胞收縮分離脫落即可用完全培養(yǎng)液終止消化即可。
· 細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基2-3天不進行換液，培養(yǎng)基會變深，變黑的現(xiàn)象，是正�，F(xiàn)象。
· 為確保培養(yǎng)基的新鮮，建議完全培養(yǎng)基避光保存，減少添加劑的降解。
· 嚴格無菌操作，避免細菌、真菌或支原體污染。定期檢測細胞是否被支原體污染，必要時使用支原體清除試劑處理。
3. 細胞信息
· 細胞特征：HL-1細胞應(yīng)呈現(xiàn)典型的梭形或多邊形部分貼壁不牢固的圓形，排列緊密。
· 倍增時間：~35-50 小時，生長緩慢，(80%匯合度T25瓶傳2個T25培養(yǎng)瓶長滿約4-6天)
· 換液頻率：2~3次/周
4.細胞復(fù)蘇
· 從液氮中取出凍存的HL-1細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉(zhuǎn)移到實驗室)
· 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至含預(yù)溫培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。（T25添加7ml）
· 將細胞接種于預(yù)先涂覆明膠的培養(yǎng)皿中，置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
· 由于該細胞復(fù)蘇后貼比率差，且形態(tài)不好看，我司決定HL-1細胞以凍存管的方式出售。
· 以下圖片是我司客戶收到凍存管復(fù)蘇后第二天細胞圖。復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶后4-5天可進行傳代處理。期間可換液一次。(T25瓶7ml培養(yǎng)基)。
（hl-1細胞復(fù)蘇第二天，圖片由手機拍攝，中喬客戶提供）
5. 細胞傳代
· 當(dāng)細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代。
· 棄去舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕洗滌細胞。
· 加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化8-15分鐘。消化成流沙狀成單個細胞脫落。
· 加入完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細胞至單細胞懸液。
· 按1:2或1:3的比例將細胞接種至新的明膠包被培養(yǎng)皿中。
6. 細胞凍存
· 選擇對數(shù)生長期的細胞，消化并收集細胞懸液。
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
· 用凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸細胞，分裝至凍存管中。
· 采用程序降溫法或無血清凍存液，最后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
二、HL-1細胞的應(yīng)用前景
HL-1細胞因其獨特的心肌細胞特性，在心血管研究中具有廣泛的應(yīng)用價值：
· 疾病模型構(gòu)建：通過基因編輯或藥物處理，模擬心肌肥厚、心律失常等疾病狀態(tài)。
· 藥物篩選：用于評估藥物對心肌細胞的影響，加速新藥研發(fā)進程。
· 分子機制研究：揭示心臟發(fā)育、代謝及信號通路的分子機制。
HL-1細胞的培養(yǎng)雖然具有一定的挑戰(zhàn)性，但只要掌握正確的操作方法和注意事項，便能充分發(fā)揮其在心臟研究中的潛力。無論是探索心臟疾病的奧秘，還是開發(fā)新型治療藥物，HL-1細胞都將成為您科研路上的得力助手。讓我們一起用心呵護這些“跳動”的細胞，為心血管健康貢獻一份力量！
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