Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase 來源于枯草桿菌(Bacillus stearothermophilus)的DNA聚合酶，能夠耐受高溫(最高可達(dá)65°C)，保持較高的活性。Bst DNA聚合酶具有熱穩(wěn)定性高、不具外切活性、高保真和較高活性等優(yōu)點(diǎn)，使其非常適合用于高溫PCR及需要單鏈末端產(chǎn)物和高保真序列的實(shí)驗(yàn)。Bst DNA聚合酶本身不具有5'→3'外切酶活性和3'→5'外切酶活性，可以產(chǎn)生帶單鏈過伸端的PCR產(chǎn)物。這有利于其用于一些需要帶單鏈末端產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn)，如CRISPR等。Bst DNA聚合酶在產(chǎn)物克隆和測(cè)序、酶促研究以及技術(shù)和產(chǎn)品開發(fā)等領(lǐng)域有重要應(yīng)用。Bst DNA聚合酶可以實(shí)現(xiàn)LAMP產(chǎn)物的高保真和快速擴(kuò)增，縮短反應(yīng)時(shí)間，提高效率，且易于操作，這為L(zhǎng)AMP技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用提供重要支持。

 

特點(diǎn)：

1. 高保真

Bst DNA聚合酶具有較高的DNA復(fù)制保真度，可以準(zhǔn)確擴(kuò)增DNA序列，產(chǎn)生高保真的擴(kuò)增產(chǎn)物。這使其非常適合用于對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物序列要求較高的實(shí)驗(yàn)。

2. 較高活性

 Bst DNA聚合酶具有較高的DNA聚合活性，可以在較短時(shí)間內(nèi)完成DNA的復(fù)制和擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)快速PCR擴(kuò)增。這可縮短PCR反應(yīng)時(shí)間，加快擴(kuò)增進(jìn)程。

3. 易操縱

Bst DNA聚合酶易于精制和純化，價(jià)格較低廉，使用也較為方便，這使其成為常用的DNA聚合酶之一。

 

Bst DNA聚合酶應(yīng)用較廣泛:

1. 高溫PCR

Bst DNA聚合酶能耐高溫，可以用于高溫PCR，擴(kuò)增GC含量高和復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板。這在擴(kuò)增一些病原體DNA和環(huán)境DNA時(shí)具有重要意義。

2. CRISPR/Cas9基因編輯

CRISPR/Cas9系統(tǒng)需要帶單鏈過伸端的gRNA和線性化質(zhì)粒，Bst DNA聚合酶不具外切活性，可以用于制備這些產(chǎn)物。

3. 產(chǎn)物克隆

使用Bst DNA聚合酶可以產(chǎn)生帶dA突出端的PCR產(chǎn)物，易于使用TA克隆進(jìn)行克隆，這為一些實(shí)驗(yàn)提供方便。

4. 測(cè)序

Bst DNA聚合酶可以產(chǎn)生高質(zhì)量的PCR產(chǎn)物，這為基因測(cè)序等實(shí)驗(yàn)提供理想的模板。

5. 酶促動(dòng)力學(xué)研究

Bst DNA聚合酶易于純化和定量，其酶促動(dòng)力學(xué)研究具有重要理論意義。

6. 技術(shù)開發(fā)

Bst DNA聚合酶用于LAMP、RPA、SMRT測(cè)序等技術(shù)的開發(fā)，拓展科研方法和手段。

7. 生物反應(yīng)器

Bst DNA聚合酶可以配合生物反應(yīng)器連續(xù)產(chǎn)生PCR產(chǎn)物，這在一些生產(chǎn)過程中具有應(yīng)用。

8. 檢測(cè)試劑盒

許多PCR檢測(cè)試劑盒選擇Bst DNA聚合酶作為DNA聚合酶，用于病原體的檢測(cè)。

 

Bst DNA聚合酶在LAMP技術(shù)的應(yīng)用:

1. 高保真

Bst DNA聚合酶具有較高的DNA復(fù)制保真度，可以準(zhǔn)確擴(kuò)增DNA序列，實(shí)現(xiàn)LAMP產(chǎn)物的高保真擴(kuò)增。這對(duì)LAMP產(chǎn)物的序列要求較高的應(yīng)用具有重要意義。

2. 熱穩(wěn)定

Bst DNA聚合酶能夠耐受LAMP反應(yīng)的高溫(通常65°C)，在此溫度下保持較高活性，可以實(shí)現(xiàn)快速的等溫?cái)U(kuò)增。這使LAMP反應(yīng)時(shí)間大大縮短，加快檢測(cè)速度。

3. 不具外切活性

Bst DNA聚合酶本身不具有外切酶活性，不會(huì)降解LAMP引物和產(chǎn)物的單鏈過伸端。這有利于LAMP反應(yīng)的進(jìn)行和產(chǎn)物的穩(wěn)定。

4. 較高活性

Bst DNA聚合酶具有較高的DNA聚合活性，可以在LAMP反應(yīng)溫度下快速完成DNA鏈的合成，實(shí)現(xiàn)快速等溫?cái)U(kuò)增。這也可縮短LAMP反應(yīng)時(shí)間，提高擴(kuò)增效率。

5. 易操作

Bst DNA聚合酶較易純化和使用，這使其適合用于LAMP技術(shù)的商業(yè)化和普及。