胎牛血清在生物醫(yī)學研究，以及細胞培養(yǎng)領域中，應用廣泛。胎牛血清含有豐富的生長因子、蛋白質和其他生物分子，對細胞生長和增殖具有重要作用。所以血清的種類和品質對于細胞的生長產(chǎn)生極大的影響。

下面將針對血清如何儲存、融化、為何出現(xiàn)沉淀以及如何減少沉淀做出詳細分析。希望能幫助您解決血清使用上出現(xiàn)的問題。

Q1. 血清長期儲存的條件和方法

血清如需長期保存，則必須儲存于-10℃或更低溫冰箱中，建議存放于-20℃的冰箱中。研究表明儲存在-80℃條件下的血清在性能方面變化不大，但由于解凍時溫差過大，會導致析出更多沉淀，使得背景雜亂，因此血清長期保存不建議處于-80℃條件下。如果近期會頻繁使用血清，我們建議不要在4℃條件下存放超過1個月，若一次無法用完整瓶建議分裝后保存，且要避免反復凍融。另外，血清冰凍后體積會增加約10%，因此血清分裝時請留意預留一定的體積空間。

Q2. 如何進行血清的程序性解凍？

程序性解凍血清可以確保血清制品質量的穩(wěn)定性，且不會因為溫差過大而析出過多蛋白等沉淀。程序性解凍方法是于實驗開始之前將冷凍的血清置于4℃冰箱中融解，并且在解凍過程中每隔1小時搖勻一次，使溫度與成分均一，減少沉淀析出，直至全部解凍，然后再移入室溫條件下使用。

Q3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)絮狀沉淀該如何處理？

造成血清發(fā)生絮狀沉淀的原因主要是血清解凍過程中溫差帶來了脂蛋白變性和纖維蛋白析出，沉淀本身不會影響血清質量，也不會對實驗結果造成影響。但如必須處理沉淀，則可通過離心方式去除，如500-1000×g離心5-10 min。

Q4.血清沉淀是什么？

血清非人工產(chǎn)品，沉淀出來系自然現(xiàn)象，沉淀主要是纖維蛋白原，其次是鹽析出。如磷酸鈣等，還有一些膽固醇和脂肪酸以及其他蛋白析出物質等。

沉淀不會影響其對細胞的促生長作用：技術人員對此問題有過深入研究證明，血清沉淀對細胞的生長沒有影響，但有一個例外：沉淀對巨噬細胞的培養(yǎng)會有一些影響。
 

Q5.哪些因素血清沉淀會增加？

血清熱滅活、37℃培養(yǎng) 、反復凍融、溶解過程中沒有搖勻、伽馬射線照射、長期存放在 2-8°C、血清加入到RPMI 1640中時、pH升高時、在培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基的蒸發(fā)等等因素都會導致沉淀的增加。
 

Q6. 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？

1.解凍時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一；
2.分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡）；
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍，較大的溫差，易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀；
4.切勿將血清置于37℃過長時間，否則可能使之渾濁，其中一些不穩(wěn)定的組分也會因此受到影響，最終降低血清的品質；
5.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟；
6.若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且保持搖晃均勻。溫度過高、時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

 

Q7.血清中的小黑點是什么？

血清解凍過程溫差過大、經(jīng)反復凍融或通過熱滅活處理后更容易產(chǎn)生沉淀，這些沉淀物在鏡下觀察時有一些會呈現(xiàn)以布朗運動的小黑點，業(yè)內(nèi)流行一種“黑膠蟲”污染的說法，但“黑膠蟲”一直以來都是極為神秘的存在，至今科學家們也沒有完整的實驗結果可以證實它究竟是一種生物還是非生物，更有人認為“黑膠蟲”是血清的原蟲，或誤以為是細菌或真菌污染。但科學家通過進一步的研究發(fā)現(xiàn)它們更可能是血清中的蛋白結晶。這種結晶可能為蛋白析出，如纖維蛋白原凝結成纖維蛋白；或是鹽析出，如磷酸鈣等；也有一些是膽固醇和脂肪酸。以下圖片就證實了這一說法，如纖維蛋白和磷酸鈣。
 

Q8.血清是否需要熱滅活處理?

血清是否需要滅活取決于您的應用。加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES 細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

熱滅活是指56℃， 30分鐘加熱已徹底凍結的血清。加熱過程中須規(guī)矩搖晃均勻。目的是使血清中的補體成分(complement)滅活。除非有必要，一般不建議做此熱處理，因為熱處理會形成血清沉積增多，而且還會影響血清的質量。補體參與反應有: 平滑肌細胞收縮、 肥大細胞和血小板釋放組胺、 增強吞噬作用、促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)作化學趨化和活化。相關研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。
 

Q9.如何進行血清滅活處理？  

血清請先按上述「血清應如何融解」中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時請將血清置于 56 ℃ 水浴 30 分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時將裝有血清和水的容器同時放入 56 ℃ 水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清，當溫度計顯示達到 56 ℃ 左右，開始計時。56 ℃ 水浴后，建議馬上轉移到冰上降溫。
 

Q10.血清在4度冰箱能放多久？對細胞有何影響呢？  

根據(jù)文獻顯示血清和血漿在4℃條件儲存2小時，血清中的成分就會發(fā)生變化，所以建議用戶在使用血清要分裝成自己常用的規(guī)格，建議現(xiàn)配現(xiàn)用。如果不能實現(xiàn)現(xiàn)配現(xiàn)用的話，配好的完全培養(yǎng)基在4℃保存的時間不要超過1周，如果期間使用頻次較高或恢復室溫次數(shù)較多時，能夠保存的時間還會減少。
 

Q11.血清使用濃度是多少?

原則上血清添加量不要太多，通常分為5%、10%、20%幾檔，部分細胞原代提取時會使用20%血清，大部分細胞正常培養(yǎng)時會使用10%的血清濃度。至于某一株細胞適應什么樣的血清濃度，還需要根據(jù)細胞特性、實驗目的做測試和調(diào)校。
 

Q12.如何選擇批間差小的胎牛血清？

血清批間差是客觀存在的，因為血清制品來源于天然活體，供體牛只的生理狀況、健康狀況均不同，且受飼養(yǎng)環(huán)境的地形、風貌、飲食、水源等影響，體內(nèi)各類蛋白、生長因子和酶類的含量均有巨大差異，所以血清具有含量復雜且不固定的特性，批間差異也是有可能的，因此選擇批間差異小的血清不僅可以保證血清質量，確保細胞培養(yǎng)效果，還能減少由于批間差異帶來的使用前測試，且避免實驗結果的不可重復性。