WB實(shí)驗(yàn)常用Jackson二抗清單

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Jackson ImmunoResearch二抗產(chǎn)品久經(jīng)考驗(yàn)，被眾多文獻(xiàn)使用認(rèn)證，專(zhuān)業(yè)提供適用于Western Blotting的眾多具有種屬特異性的二抗品種，包括辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、生物素標(biāo)記的抗體及鏈霉親和素，可用于傳統(tǒng)的底物顯色及底物化學(xué)發(fā)光（ECL）的免疫印跡技術(shù)。同時(shí)，Jackson ImmunoResearch提供覆蓋紅外光譜范圍的多種染料標(biāo)記二抗，適用于最新的多色圖片采集處理系統(tǒng)。

建議操作稀釋范圍及PAP復(fù)合物 Jackson ImmunoResearch專(zhuān)業(yè)提供親和純化的辣根過(guò)氧化物酶—抗辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物(PAP)，可用于檢測(cè)HRP或增強(qiáng)HRP復(fù)合物分子的信號(hào)。

可溶性PAP復(fù)合物貨號(hào)濃度規(guī)格山羊Goat PAP 123-005-024 20 mg/ml 0.25 ml 老鼠Mouse PAP 223-005-024 20 mg/ml 0.25 ml 兔Rabbit PAP 323-005-024 20 mg/ml 0.25 ml Jackson ImmunoResearch標(biāo)記抗體、鏈霉親和素及PAP復(fù)合物建議稀釋范圍如下表所示：產(chǎn)品化學(xué)發(fā)光顯色 HRP-Antibody 1:10K - 1:200K 1:5K - 1:100K Alkaline Phosphatase-Antibody 1:5K - 1:50K 1:5K - 1:50K Biotin-Antibody 1:20K - 1:400K 1:20K - 1:400K Alexa Fluor® 680 and 790-Antibody 1:50K - 1:200K 1:50K - 1:200K HRP-Streptavidin 0.01 - 0.1 μg/mL 1 - 2 μg/mL Alkaline Phosphatase-Streptavidin 0.1 - 1.0 μg/mL 1 - 2 μg/mL PAP 1:5K - 1:100K 1:5K - 1:100K WB適用的熒光染料標(biāo)記二抗 Alexa Fluor®680是一種激發(fā)波長(zhǎng)702nm，發(fā)射波長(zhǎng)684nm的遠(yuǎn)紅外熒光染料。Alexa Fluor®790為激發(fā)波長(zhǎng)803nm，發(fā)射波長(zhǎng)783nm的紅外發(fā)光染料（圖1）。由于低熒光猝滅、高消光系數(shù)和低的背景熒光，使得抗體結(jié)合遠(yuǎn)紅外及紅外發(fā)光染料比可見(jiàn)光更靈敏。 圖1 標(biāo)記二抗的Alexa Fluor®680（左）和Alexa Fluor®790（右）的激發(fā)和發(fā)射光譜遠(yuǎn)紅外及紅外熒光染料適用于高靈敏度的免疫印跡，定量免疫印跡（quantitative Western blots），凝膠印跡（in-gel Western blots），微印跡分析（microWestern arrays），in-cell Western arrays，on-cell Western arrays microwestern，組織切片成像，小動(dòng)物全身成像及其他需要強(qiáng)光的技術(shù)。免疫沉淀后WB實(shí)驗(yàn)二抗的選擇針對(duì)免疫沉淀后的Western Blotting研究，Jackson可提供特異性針對(duì)輕鏈或Fc片段的抗體，分別檢測(cè)分子量50kDa及25kDa以上的抗原。當(dāng)使用特異性標(biāo)記重鏈和輕鏈的二抗，如抗IgG（H+L），進(jìn)行免疫沉淀后的Western Blotting檢測(cè)，重鏈與輕鏈的分子量大小分別約為50 kDa、25 kDa（圖2A）。當(dāng)使用特異性標(biāo)記輕鏈的IgG輕鏈二抗（圖2B）時(shí)，僅結(jié)合到一抗的輕鏈上。使用HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG與使用特異性針對(duì)輕鏈的IgG 輕鏈二抗電泳圖譜比較圖2 使用HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG（H+L）能夠檢測(cè)出重鏈（50kDa）及輕鏈（25kDa）；而使用特異性針對(duì)輕鏈的IgG 輕鏈二抗，即使在IgG過(guò)載的情況下，亦不能夠檢測(cè)出重鏈。因此，50kDa左右的蛋白檢測(cè)為避免重鏈的干擾，可以選用輕鏈特異性的二抗，從而將IP或者Co-IP中的面臨的重鏈干擾降到最低；同理，25kDa左右的蛋白檢測(cè)為避免輕鏈的干擾，可以選用Fc片段特異性的二抗。